羊急性心梗卸负荷模型的miRNA表达谱

摘要

目的:
　　心肌细胞因缺乏再生能力，遇到缺血缺氧等多种原因将导致心肌细胞损伤，造成心肌细胞丢失、纤维组织增生，引发心室重构，并逐渐进展成心力衰竭。左心室循环辅助装置(LVAD)已经被证明是治疗心力衰竭的有效手段，使用LVAD进行机械循环支持可以通过对衰竭的左心室卸负荷的方式带来有利的影响。然而，LVAD在急性心肌梗死治疗的应用还需进一步研究论证，LVAD对AMI后期的预后及其机制有待进一步阐明。
　　微小RNA(miRNA，miRNA)是一种21-23个碱基组成的内源性非编码单链小分子RNA，可在转录后水平调控基因的表达。MiRNA参与多种病理生理学过程。目前miRNAs在心肌缺血中的功能与机制研究尚处于起步阶段，尤其是有关心肌缺血早期miRNAs改变的报道较少。也没有在AMI早期采取LVAD干预后，对心肌细胞内部miRNA的分析，及其相关信号通路的研究。本文试图在羊急性心梗模型上建立miRNA表达谱，为LVAD治疗急性心梗提供理论依据。
　　方法:
　　1、成年小尾寒羊经结扎冠状动脉制作心梗模型，心脏不停跳植入FW-2型轴流泵，分别为对照组和卸负荷组。
　　2、模型建立后，进行心电图检测，同时置入Swan-gaze漂浮导管进行检测记录。
　　3、72小时后，分别取对照组和卸负荷组的心肌组织，分为正常区域，梗死边带区域以及梗死区域，进行组织染色法。
　　4、TUNEL法检测心肌细胞的凋亡情况。
　　5、高通量测序技术建立miRNA表达谱。
　　6、比较对照组和卸负荷组相应区域心肌中差异表达的miRNA。
　　7、PCR对测序结果进行验证。
　　8、验证后对差异表达的miRNA进行功能和信号通路分析。
　　结果:
　　1、对照组动物实验共进行7只，其中3只造模成功。LVAD组动物实验共有5只，其中3只成功。
　　2、HE染色结果显示与对照组相比，卸负荷组心肌细胞破坏减弱，同时炎症细胞浸润明显减少。Masson染色结果显示卸负荷组胶原化面积减小，心肌细胞保留较多。天狼猩红染色结果显示卸负荷组胶原化明显减轻;对比梗死区域，卸负荷后主要是Ⅲ型胶原，而对照组则主要是Ⅰ型胶原。
　　3、TUNEL结果显示心梗卸负荷后，心肌细胞凋亡明显减弱。
　　4、卸负荷组与对照组相比，心梗区域差异表达的miRNA是oar-miR-19b（上调）;梗死边带区域差异表达的miRNA有3个，其中下调的是oar-miR411b-5p和oar-miR-487a-5p，上调的是oar-miR-26a。
　　5、PCR验证结果显示oar-miR-19b(P＜0.05)和oar-miR-26a(P＜0.01)在卸负荷组与对照组中表达有明显差异，与芯片结果相符。
　　6、GO和KEGG分析结果显示oar-miR-19b和oar-miR-26a所涉及到的功能和信号通路均与心血管疾病有密切的关系。
　　结论:
　　本实验利用FW-2型轴流泵成功地对急性心梗的羊进行了3天的循环辅助，证实LVAD可有效减轻心梗程度。成功地建立了急性心梗和LVAD干预的miRNA表达谱，并进行了验证，结果表明该表达谱可用于探索未知的miRNA，并研究它们参与急性心梗反应的调控机理。

目录

摘要

前言

研究对象与方法

一、研究对象

二、实验试剂及仪器

三、实验方法

1、动物模型制作

2、病理染色

3、心肌凋亡检测(TUNEL法)

4、MiRNA测序

5、测序结果分析

6、MiRNA差异性表达

7、PCR验证测序结果

8、差异表达的miRNA靶基因预测分析

9、注释和富集分析

10、数据统计

研究结果

1、心梗模型制作与卸负荷

2、三天后取出标本后检查

3、miRNA测序结果

4、差异表达的已知的miRNA靶基因网络图

5、选取差异表达已知的miRNA实时荧光定量PCR验证结果

6、经验证差异表达的已知的miRNA的二级结构

7、对经验证的差异表达己知的miRNA进行GO和KEGG分析

8、补充数据结果

讨论

参考文献

综述 MiRNA与急性心肌梗死

致谢

个人简历

声明