中国汉族人群HLA-C表达水平及云南独龙族HLA-KIR配受体分布研究

摘要

本文主要从以下几方面展开论述：
　　第一部分 中国汉族人群HLA-C等位基因表达研究。
　　目的：
　　研究中国汉族人群外周血和脐带血中HLA-C等位基因表达水平差异及相关影响因素，为HLA-C禁忌错配分析提供基础数据。
　　方法：
　　采用PCR-SBT技术对外周血和脐带血样本进行HLA-C测序分型;采用流式细胞技术检测外周血和脐带血样本HLA-C抗原表达水平;采用qPCR方法检测HLA-C mRNA转录水平，使用HLA-C位点特异性引物检测外周血和脐带血总HLA-C mRNA转录水平，使用HLA-C等位基因特异性引物检测外周血HLA-C*01:02，C*07;02，C*06:02和C*03:04mRNA转录水平;并应用Sanger测序技术对rs2395471进行基因分型，分析rs2395471基因型与HLA-C抗原表达水平的关系以及rs2395471基因型和HLA-C等位基因的连锁不平衡(linkagedisequilibrium LD)关系。
　　结果：
　　在105名健康自愿者中，共发现17种HLA-C等位基因。外周血中HLA-C等位基因抗原表达平均水平为MFI=258±86，不同HLA-C等位基因抗原表达水平存在差异，外周血中HLA-C抗原表达水平较高的等位基因是C*01:02，14:02，表达水平较低的等位基因是C*03:02，07:01，07:02，08:01和12:02。外周血HLA-CmRNA转录水平平均值为0.77±0.27(2-ΔΔCt)，不同HLA-C等位基因之间mRNA转录水平变异较小，仅等位基因C*06:02和15:02转录水平高于其它等位基因，差异具有统计学意义(P＜0.05)。在150份脐带血样本中，共发现18种HLA-C等位基因。脐带血中HLA-C等位基因转录水平平均值为0.42±0.16(2-ΔΔCt)，不同HLA-C等位基因转录水平差异没有统计学意义(P＞0.05)。中国汉族人群中rs2395471为AA基因型的个体其HLA-C抗原表达水平最高，rs2395471为GG基因型的个体其HLA-C抗原表达水平最低，rs2395471为AG基因型时，其个体HLA-C抗原表达水平介于前两者之间。rs2395471_A与HLA-C*0I:02，04:01，06:02，12:02，14:02,15:02有完全连锁关系;rs2395471G与HLA-C*03:02，03:03，03:04,07:02，08:01有完全连锁关系。
　　结论：
　　中国汉族人群外周血HLA-C抗原表达水平和mRNA转录水平均与HLA-C等位基因有相关性;HLA-C等位基因与rs2395471有完全连锁关系，可根据rs2395471区分高表达HLA-C等位基因和低表达HLA-C等位基因;等位基因特异性引物qPCR比位点特异性引物qPCR更能反映HLA-C mRNA转录水平;脐带血HLA-C抗原表达水平和mRNA转录水平均处于较低水平。
　　第二部分 云南独龙族人群HLA-KIR配受体对分布研究。
　　目的：
　　分析云南独龙族人群杀伤细胞免疫球蛋白样受体(killer cellimmunoglobulin-like receptors，KIR)基因和HLA多态性，基因频率分布以及配对情况。
　　方法：
　　从云南独龙族献血者中随机选取152名无亲缘健康志愿者，采用多重PCR-SSP方法对KIR基因进行检测。使用等位基因频率网络数据库(The AlleleFrequency Net Database，AFND)中的ID号对检测到的基因型进行命名。采用PCR-SBT方法对HLA基因进行分型。以SPSS19.0进行人群间KIR基因频率的卡方检验。采用Neighbor-joining法构建群体间系统进化树，MEGA软件进行可视化。
　　结果：
　　在云南独龙族献血人群中，16个KIR基因均有发现，其中框架基因KIR2DL4、3DL2、3DL3和3DP1与非框架基因KIR2DL1、2DL3和2DP1存在于所有个体;较为常见KIR基因有2DS4和3DL1，其基因频率分别为97％和98％;频率较低的基因有IR2DL2、2DL5、2DS1、2DS2、2DS3、2DS5和3DS1，其基因频率分别为7％、30％、28％、7％、20％、11％和28％。在152名个体中共发现10种KIR基因型，其中以ID号为1、2和8的基因型最为常见，频率分别为66.4％、9.2％和14.5％。在这些个体中共有8种单体型，其中A1、B1和B2单体型最为常见，频率分别为81.9％、8.9％、5.3％。HLA-C1和HLA-C2基因频率分别为92.1％和7.9％。含有Bw4基序的HLA-A和-B基因频率分别为5.3％和6.6％。抑制性KIR/HLA-C受配体对出现在所有个体中，含有1、2、3对KIR/HLA-C受配体对的个体占总体的86.9％、8.5％和4.6％。在KIR/HLA-Bw4配对中，KIR3DL1+HLA-Bw4和KIR3DS1+HLA-Bw4受配体对频率分别为12.5％和1.3％。两者均含有的频率为5.3％，两者均没有的频率为80.9％。
　　结论：
　　云南独龙族人群KIR，HLA和KIR/HLA受配体对有独特的分布特点，抑制性的KIR/HLA配受体对占主导地位。

目录

第一部分 中国汉族人群HLA-C等位基因表达研究

摘要

一、前言

二、实验材料

三、实验方法

四、实验结果

五、讨论

参考文献

第二部分 云南独龙族人群HLA-KIR配受体对分布研究

摘要

一、前言

二、实验材料

三、实验方法

四、实验结果

五、讨论

参考文献

综述 HLA-C在造血干细胞移植中的研究进展

研究生期间论文发表情况

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