桉树促生菌的筛选、鉴定及促生物质的初步分离

摘要

桉树是目前华南地区主要的工业原料林树种，生长迅速且生长周期短，近几年造林面积大幅度上升，化学肥料的大量使用带来了一系列环境问题，推广应用微生物肥料技术对华南地区桉树产业发展和环境的可持续发展具有十分重要的意义。 本研究以从广东省广州市和阳江市桉树林地根际采集的土壤样品为研究对象，采用平板稀释法获得单菌落，挑取不同形态的单菌落用划线法纯化，共获得32株细菌。将这32株细菌分别在黄心土和蛭石两种基质上进行了苗木接菌试验，共筛选出7株有较好促生能力的菌株。黄心土基质一组苗木接菌试验表明菌株2306、2301和2403能明显提高桉树幼苗的苗高和生物量，菌株2306的促生效果最为明显，接种该菌桉树幼苗的苗高和生物量分别提高53.1％和190.2％。蛭石基质的苗木接菌试验表明菌株2207、1308、1201和2205能明显提高桉树苗高和生物量，其中菌株1308的接菌效果最为明显，跟对照相比苗高和生物量分别提高93.2％和317.6％。 同时测定了这些菌株的地上部分和地下部分N、P含量，以及菌株的ACC脱氨酶活力，结果表明能促进桉树幼苗高与生物量的菌株有较高的ACC脱氨酶比活力，且这些菌株接种的桉树幼苗的地上部分和地下部分N、P含量均不同程度地高于对照，以地上部分N含量、地下部分N和P含量的增幅较大。 通过生理生化、Biolog和16SrDNA序列分析对这些菌株进行了鉴定。鉴定结果为:菌株1201、2306、2207菌株为腊状芽孢杆菌(Bacillus cereus)，登录号分别为KJ765693、KJ765697、KJ765696，菌株2205为解木糖赖氨酸芽孢杆菌（ysinibacillus xylanilyticus），登录号为KJ765695，菌株2403、1308分别为粪产碱菌属中的Alcaligenes aquatilis和Alcaligenes faecalis，登录号分别为KJ765698和KJ765694。 对有较好促生效果的菌株发酵液进行离子交换层析并再次进行桉树幼苗接种试验，结果表明:跟对照相比，差异显著的几个菌株组分在相同条件下接种，对桉树苗高生长促进作用顺序为:2207F2＞2207F1＞2306F2＞2306F1＞1308F1＞1308F2＞2403F2。

目录

声明

摘要

第一章 绪论

1．1 引言

1．2 文献综述

1．2．1 植物促生菌的概述

1．2．2 国内外研究进展

1．2．3 促生菌促进植物生长方式及促生机制

1．2．4 含ACC脱氨酶细菌促进植物生长的机理

1．2．5 根际促生菌的主要分离方法

1．3 技术路线

第二章 桉树促生细菌的筛选及ACC脱氨酶比活力测定

2．1 试验材料

2．1．1 供试苗木

2．1．2 主要培养基及试剂

2．1．3 育苗基质

2．2 试验方法

2．2．1 土壤样品的采集

2．2．2 土壤营养成分测定

2．2．3 土壤样品的处理及菌株的分离

2．2．4 菌株的纯化

2．2．5 树苗接菌方法

2．2．6 优良促生菌株ACC脱氨酶比活力的测定

2．2．7 接菌后桉树幼苗N、P元素含量的测定

2．2．8 数据分析

2．3 结果与分析

2．3．1 土样分析结果

2．3．2 桉树苗木接菌试验

2．3．3 促生菌株ACC脱氨酶比活力

2．3．4 促生菌株对桉树苗N、P含量的影响

2．4 讨论

第三章 桉树促生菌株的鉴定

3．1 试验材料

3．1．1 供试菌株及主要仪器

3．1．2 培养基及试剂

3．2 试验方法

3．2．1 分子鉴定

3．2．2 形态及生理生化鉴定

3．3 结果与分析

3．3．1 培养特征和形态特征

3．3．2 菌株的16SrDNA鉴定

3．3．3 生理生化鉴定

3．3．4 菌株的Biolog鉴定

3．4．5 16SrDNA序列相似性分析

3．5 结论与讨论

3．5．1 结论

3．5．2 讨论

第四章 促生菌活性物质的初步分离

4．1 材料和试剂

4．1．1 材料

4．1．2 试剂

4．2 试验方法

4．2．1 样品预处理及准备工作

4．2．2 阴离子层析

4．2．3 苗木接菌试验

4．2．4 数据分析

4．3 结果与分析

4．3．1 分离结果

4．3．2 不同组分苗木接菌效果比较

4．4 讨论

第五章 结论与展望

5．1 结论

5．2 展望

参考文献

致谢