大孔吸附树脂和逆流色谱分离纯化莱菔硫烷的研究

摘要

莱菔硫烷(CH<,3>S(O)CH<,2>CH<,2>CH<,2>CH<,2>N=C=S)是目前公认的防癌和抗癌效果最好的天然产物之一，是自然界存在的诱导II型解毒酶能力最强的诱导物。随着研究的深入，人们发现莱菔硫烷不仅可以提高机体抗氧化的能力，而且还可以抑制并杀死癌细胞。考虑到莱菔硫烷在今后的癌症预防和治疗中必将发挥的积极作用，科研工作者们已经将其视为研究的热点。本文利用大孔吸附树脂和制备高速逆流色谱来分离纯化莱菔硫烷。 本文研究了不同大孔吸附树脂对于莱菔硫烷的吸附和解析特性，发现SP850具有最大的吸附率，而且对吸附机理进行了Langmuir和Freundlich．模型拟合，Langmuir和Freundlich方程的相关系数(R<'2>)均>0.9300。为了优化分离工艺，采用SP850填充柱进行了动态吸附和解析实验。结果表明吸附的最佳参数是：流速：5BV/H，pH2，温度：25℃；解析：乙醇-水(40：60，v/v)，6BV洗脱液，流速：6BV/H。莱菔硫烷的最高纯度达到85.9％，即是青花菜种子中含量的107倍。此结果显示SP850树脂对于分离莱菔硫烷有很高的效率。 天然产物中活性成分的分离会面临很多问题，比如目标活性物的含量在复杂混合物中比重很小。本文采用高速逆流色谱(HSCCC)从青花菜种子中分离和纯化莱菔硫烷。通过分析型HSCCC获得溶剂系统是正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(1：5：1：5，v/v)，并在此溶剂体系下采用制备HSCCC，分离982.1mg粗提物(纯度是30.4％)，可以得到纯度大于90％的莱菔硫烷286.6mg。本文还对四种纯化方法(低压正相制备色谱，反相制备色谱，大孔吸附树脂分离和制备逆流色谱)的产品纯度、分离周期和生产成本进行了比较。结果显示，大孔吸附树脂生产中等纯度产品具有经济性；产品纯度大于90％时，宜采用制备逆流色谱和制备反相液相色谱。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章文献综述

1.1概述

1.2莱菔硫烷的性质及功能

1.2.1莱菔硫烷的生理功能

1.2.2莱菔硫烷的抗氧化功能

1.2.3莱菔硫烷的抗癌功能

1.2.4莱菔硫烷与其它抗癌物的协同作用

1.2.5莱菔硫烷对癌转移的抑制作用

1.2.6莱菔硫烷减少脑部血管梗塞

1.2.7莱菔硫烷的稳定性

1.3莱菔硫烷的测定方法

1.4莱菔硫烷的制备方法

1.4.1全化学合成法

1.4.2化学法和生物法相结合

1.4.3天然产物提取

1.5莱菔硫烷的市场前景

1.6大孔吸附树脂

1.7高速逆流色谱

1.8本实验研究的目的、内容及意义

第二章大孔吸附树脂分离纯化莱菔硫烷

2.1实验材料和仪器

2.1.1实验材料

2.1.2实验仪器

2.2实验方法

2.2.1色谱条件

2.2.2对照品溶液的配制

2.2.3线性关系

2.2.4莱菔硫烷样品的制备

2.2.5精密度实验

2.2.6回收率实验

2.2.7应用

2.2.8大孔吸附树脂静态实验

2.2.9吸附率和解析率的计算

2.3结果与讨论

2.3.1大孔吸附树脂的选择

2.3.2大孔吸附树脂的吸附机理模拟

2.3.3流速对于吸附莱菔硫烷的影响

2.3.4解析速度对于解析率的影响

2.3.5洗脱方式对莱菔硫烷纯度的影响

2.4小结

第三章逆流色谱分离纯化莱菔硫烷

3.1实验材料和仪器

3.1.1实验材料

3.1.2实验仪器

3.2实验方法

3.2.1莱菔硫烷样品的制备

3.2.2莱菔硫烷含量的测定

3.2.3溶剂体系的配制

3.2.4莱菔硫烷在体系中的分配系数

3.2.5分析型高速逆流色谱分析方法的确定

3.2.6制备型HSCCC分离条件

3.3溶剂体系的筛选

3.4分析型HSCCC最佳分离条件的确定

3.4.1流动相流速及转速对分离效果的影响

3.4.2溶剂体系对分离效果的影响

3.5制备型HSCCC分离纯化莱菔硫烷

3.6小结

第四章分离纯化莱菔硫烷方法比较

4.1实验材料和仪器

4.1.1实验材料

4.1.2实验仪器

4.2实验方法

4.2.1莱菔硫烷含量的测定

4.2.2低压正相硅胶色谱制备莱菔硫烷

4.2.3反相色谱制备莱菔硫烷

4.2.4大孔吸附树脂分离纯化莱菔硫烷

4.2.5高速逆流色谱制备莱菔硫烷

4.3分离纯化莱菔硫烷方法比较

4.3.1各分离方法制得产品纯度和回收率比较

4.3.2试剂消耗比较

4.3.3工艺特征比较

4.4小结

第五章结论

参考文献

附录

致谢

研究成果及发表的学术论文