山楂蜂花粉多糖提取、分离纯化、结构鉴定和生物活化的研究

摘要

近年来，花粉作为优良的全营养食物被全世界广泛关注，掀起一股“花粉研究热”，而且国内对花粉的基础研究和应用研究也已经全面开展，并取得可喜成果，有些方面已进入国际研究的前沿。山楂蜂花粉在中国北方产量巨大，充分利用我国山楂蜂花粉资源，对山楂蜂花粉进行深入系统研究，使这一丰富资源的开发和利用提高到一个新的水平，将会产生极大的经济效益和社会效益。 本文以山楂蜂花粉为原料，采用复合破壁法即采用机械破壁、冷冻破壁和酶法破壁三种方法进行分花粉破壁，以此达到较为理想的破壁效果。同时通过试验设计对热水浸提、乙醇沉淀的工艺进行了优化，最后经过脱蛋白、透析得到多糖粗品(CPP)。CPP通过DEAE Sepharose CL-6B凝胶柱层析进一步纯化得到CPP-1和CPP-2两种组分。经红外光谱检测证实具有多糖类物质的特征吸收峰。然后通过Sephadex G-100凝胶柱层析检测为单一对称峰，并通过高效凝胶色谱测得两者分子量分别为3．7×105Da和7．8×104Da。通过气相色谱测得CPP-1由L-鼠李糖、L-果糖、D-阿拉伯糖、D-木糖、D-甘露糖、D-半乳糖和D-葡萄糖七种单糖组成，其摩尔比为0．67：0．44：10．16：0．66：1．03：5．51：9．94； CPP-2由L-鼠李糖、D-阿拉伯糖、D-甘露糖、D-半乳糖和D-葡萄糖五种单糖组成，摩尔比为2．12：9．82：3．60：0．89：5．56。经部分酸水解甲基化分析，结合气质联用仪，推断出CPP-1和CPP-2是由1，5-L-Araf残基组成的还原性多糖。 本研究从清除DPPH自由基、抑制羟基自由基的产生和还原力、清除超氧阴离子自由基4个方面研究了CPP、CPP-1和CPP-2的体外抗氧化效果，结果表明粗多糖CPP和纯化组分CPP-1、CPP-2对DPPH自由基的清除作用和羟基自由基的抑制作用明显，与Vc接近，而还原力和清除超氧阴离子自由基的能力低于Vc。免疫活性研究主要通过对巨噬细胞吞噬功能的影响、T淋巴细胞增殖功能的影响和NK细胞毒活性的影响来测定，相对CPP-1而言，CPP-2能显著提高小鼠的非特异性免疫和细胞免疫功能。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章 文献综述

1.1前言

1.2蜂花粉的成分、性质和作用

1.2.1蜂花粉的成分

1.2.2蜂花粉的性质

1.2.3蜂花粉的生理功能

1.3多糖研究概述

1.3.1多糖的结构分类

1.3.2多糖的结构分析

1.3.3多糖的生物活性

1.3.4多糖产品开发现状

1.3.5多糖研究中存在的问题

1.3.6多糖的应用前景

1.4立题背景、研究意义及主要研究内容

1.4.1立题背景、研究意义

1.4.2主要研究内容

1.4.3本论文的特色和创新之处

第二章 山楂蜂花粉破壁方法及多糖提取工艺研究

2.1引言

2.2实验材料

2.2.1实验原料

2.2.2实验试剂

2.2.3仪器和设备

2.3实验方法

2.3.1山楂蜂花粉破壁方法

2.3.2多糖含量测定方法

2.3.3山楂花粉多糖的提取

2.3.4山楂蜂花粉多糖提取工艺——单因素试验设计

2.3.5山楂蜂花粉多糖提取工艺——Box-Benhnken试验设计

2.4结果与分析

2.4.1山楂蜂花粉破壁实验结果

2.4.2葡萄糖标准曲线

2.4.3山楂蜂花粉多糖提取工艺——单因素试验结果分析

2.4.4山楂蜂花粉多糖提取工艺——Box-Benhnken试验设计结果

2.5小结

第三章 山楂蜂花粉多糖的分离纯化

3.1引言

3.2实验材料

3.2.1实验原料

3.2.2实验试剂

3.2.3仪器和设备

3.3实验方法

3.3.1脱蛋白

3.3.2透析

3.3.3多糖的分级

3.3.4多糖纯度的鉴定

3.3.5多糖分子量的检测

3.4实验结果与分析

3.4.1不同脱蛋白方法的比较

3.4.2牛血清白蛋白标准曲线

3.4.4 Sephadex G-100凝胶柱层析结果

3.4.5 HPGPC对山楂蜂花粉多糖各组分分子量的检测

3.5小结

第四章 山楂蜂花粉多糖的理化分析及结构鉴定

4.1引言

4.2实验材料

4.2.1实验原料

4.2.2实验试剂

4.2.3仪器和设备

4.3实验方法

4.3.1粗多糖(CPP)理化性质分析方法

4.3.2红外光谱分析

4.3.3单糖组成分析

4.3.4甲基化分析

4.4实验结果与分析

4.4.1 CPP理化分析结果

4.4.2红外光谱分析结果

4.4.3单糖组成分析结果

4.4.4甲基化分析结果

4.5小结

第五章 山楂蜂花粉多糖体外抗氧化活性的研究

5.1引言

5.2实验材料

5.2.1实验原料

5.2.2实验试剂

5.2.3仪器和设备

5.3实验方法

5.3.1清除DPPH-测定方法

5.3.2清除-OH测定方法

5.3.3还原力的测定

5.3.4清除O2-测定方法

5.4.实验结果与讨论

5.4.1山楂蜂花粉多糖对DPPH·清除作用

5.4.2山楂蜂花粉多糖对·OH清除作用

5.4.3山楂蜂花粉多糖还原能力的测定

5.4.4山楂蜂花粉多糖对O2-·清除作用

5.5小结

第六章 山楂蜂花粉多糖免疫活性的研究

6.1引言

6.2实验材料

6.2.1实验原料

6.2.2实验试剂

6.2.3仪器和设备

6.3实验方法

6.3.1动物喂养实验

6.3.2小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验

6.3.3 ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化试验(MTT法)

6.3.4 NK细胞活性的测定

6.4实验结果与分析

6.4.1山楂蜂花粉多糖对正常小鼠腹腔巨噬细胞吞噬作用的影响

6.4.2山楂蜂花粉多糖对正常小鼠脾淋巴细胞增殖作用的影响

6.4.3山楂蜂花粉多糖对正常小鼠NK细胞活性的影响

6.5小结

第七章结论与展望

参考文献

致谢

研究成果及已发表的论文

作者和导师简介