转基因植物蛋白量值溯源核心技术及标准物质研究

摘要

目前转基因技术已经开始进入大量商品化的阶段，为人们带来了巨大的经济利益与生活利益。同时，转基因产品的问题也呈现出来，人们开始担心转基因技术会对人类和环境产生负面的效果。如何正视转基因技术，合理的、高效的应用转基因技术，检测并告知消费者转基因产品信息就显得十分重要。
　　 本课题主要针对转基因植物蛋白的检测进行研究，建立转基因植物蛋白的权威计量方法，根据所建立的测量方法，研制转基因植物蛋白标准物质。通过参与国际比对，取得国际等效性，保证了试验方法的可靠性与准确性。从而建立完整的转基因植物蛋白量值溯源传递体系，解决目前转基因植物蛋白检测结果无法溯源等问题。
　　 使用同位素稀释质谱法、ELISA等方法对转基因植物中的Bt蛋白(CrylAb、CrylAc)进行定性、定量分析。同时研制相应的Bt蛋白以及肽段标准物质，为今后的转基因蛋白检测提供可靠、有效的保证。转基因蛋白测定结果的准确可比，保障了人民大众的健康，保护了国家对外贸易中的优势地位。

目录

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摘要

第一章 前言

1．1 转基因技术

1．2 转基因植物

1．3 Bt蛋白简介

1．4 检测方法

1．4．1 免疫法检测转基因蛋白

1．4．2 质谱法

1．5 量值溯源传递的要求和意义

1．5．1 量值溯源传递的要求

1．5．2 量值溯源传递的途径

1．6 蛋白质量值溯源传递国内外现状

1．6．1 蛋白质量值溯源传递国外现状

1．6．2 蛋白质量值溯源传递国内研究现状

1．7 转基因蛋白量值溯源传递框架体系的设计和建立

1．8 转基因蛋白量值溯源传递中的基本问题和关键技术

1．9 论文研究的目的及内容

1．9．1 Bt蛋白检测

1．9．2 肽段含量国际比对

1．9．3 Bt蛋白标准物质研制

第二章 转基因Bt蛋白测定

2．1 试剂和仪器

2．1．1 试剂配制

2．2 Bt蛋白质定性方法

2．2．1 质谱方法鉴定

2．2．2 酶联免疫方法鉴定

2．2．3 蛋白质印迹方法鉴定

2．2．4 小结

2．3 肽段含量测定

2．3．1 反相色谱测定肽段纯度

2．3．2 同位素稀释质谱法测定肽段含量

2．3．3 小结

2．4 Bt蛋白含量测定

2．4．1 Bt蛋白纯度测定

2．4．2 水解Bt蛋白定量

2．4．3 酶切Bt蛋白定量

2．4．4 小结

2．5 水稻中Bt蛋白含量

2．5．1 水稻中Bt蛋白提取方法研究

2．5．2 水稻中Bt蛋白的同位素稀释质谱方法

2．5．3 小结

第三章 蛋白质国际比对研究

3．1 多肽蛋白质同位素稀释质谱国际比对研究

3．1．1 实验试剂和器材

3．1．2 实验方案

3．1．3 实验结果

3．1．4 同位素稀释质谱法测定结果不确定度评定

第四章 标准物质研制

4．1 CryIAb和CryIAc标准物质的研制

4．1．1 Bt蛋白标准物质研制技术路线

4．1．2 标准物质候选物的确定及其性质

4．1．3 标准物质的制备

4．1．4 Bt蛋白标准物质参考值的测定

4．1．5 同位素稀释质谱Bt蛋白标准物质定值方法研究

4．1．6 Bt蛋白标准物质的定值

4．1．7 Bt蛋白标准物质的均匀性评价

4．1．8 Bt蛋白标准物质的稳定性评价

4．1．9 标准物质定值结果的溯源性

4．1．10 定值结果的不确定度评价

4．2 CryIAb和CryIAc酶切肽段标准物质的研制

4．2．1 肽段标准物质研制技术路线

4．2．2 肽段标准物质候选物的确定及其性质

4．2．3 肽段标准物质的制备

4．2．4 肽段标准物质参考值的测定

4．2．5 同位素稀释质谱肽段标准物质定值方法研究

4．2．6 肽段标准物质的均匀性评价

4．2．7 肽段标准物质的稳定性评价

4．2．8 肽段标准物质定值结果的溯源性

4．2．9 定值结果的不确定度评价

第五章 结论

参考文献

致谢

研究成果及发表的学术论文

作者及导师简介

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