pH-区带逆流色谱分离燕麦麸皮及甘蔗皮中酚酸类物质的研究

摘要

在我国，燕麦麸皮和甘蔗皮资源非常丰富。为了深入开发和综合利用其潜在的价值，需要对燕麦麸皮和甘蔗皮中所含的有效成分进行细致的研究。pH-区带逆流色谱技术作为一种新型的分离手段，与普通逆流色谱不同的是，该分离技术主要依据被分离物质的解离常数pKa值和疏水性的不同来实现分离。由于该方法分离所得馏分纯度高、上样量大等特点，被广泛应用于分离氨基酸衍生物、肽类衍生物、生物碱、酚酸、皂类等物质。本论文主要创建一个通用分离酚酸类物质的pH-区带逆流色谱分离方法，并将该技术用于分离天然产物中酚酸类的有效成分。
　　论文创建了七种酚酸标准物质的pH-区带逆流色谱分离方法;并将建立的分离方法应用到燕麦麸皮中酚酸类物质分离;建立了甘蔗皮中酚酸类物质的粗提工艺和pH-逆流色谱的分离方法。主要得到的结论与研究成果如下:
　　1.创建了对羟基苯甲酸、对羟基苯乙酸、香草酸、咖啡酸、丁香酸、香豆酸和阿魏酸七种酚酸标准品的pH-区带逆流色谱分离方法。溶剂体系为甲基叔丁基醚-乙腈-水(4.75∶0.25∶5);保留酸三氟乙酸和洗脱碱氨水的浓度分别为3mM和3mM，七种物质成功分离，纯度分别达到97.0％、67.3％、96.9％、82.4％、95.9％、97.2％和91.0％。
　　2.创建的标准品pH-区带逆流色谱通用方法应用到燕麦麸皮中酚酸类物质的分离中。一次从1.22g燕麦麸皮提取物中分离出49.5mg的丁香酸、109.2mg的香豆酸、184.5mg的阿魏酸，纯度分别为95.2％、93.0％和91.8％，同时咖啡酸及其他的酚酸也得到了富集。
　　3.优化了甘蔗皮中酚酸类物质的提取工艺。通过对比溶剂提取法、超声辅助萃取法、微波辅助萃取法和碱解法四种粗提方案，最终确定的提取方法为碱解法，即将甘蔗皮粉末溶解在2 mol/L NaOH溶液中，于60℃下磁力搅拌6h，然后用6mol/L的HCI溶液调节其pH值为2左右，用乙酸乙酯萃取两次，蒸干。
　　4.建立了甘蔗皮粗提物的pH-区带逆流色谱的分离方法，从1.00g的甘蔗皮提取物中分离得到了纯度为95.99％的香豆酸，同时其余的酚酸也得到了一定程度的富集。采用逆流体系为甲基叔丁基醚-乙腈-水(4∶1∶5v/v)，保留酸三氟乙酸和洗脱碱氨水的浓度分别为5mM和5mM。

目录

声明

摘要

第一章 绪论

1．1 天然产物简介

1．1．1 燕麦简介

1．1．2 甘蔗简介

1．2 酚酸简介

1．2．1 酚酸类化合物的分类及结构特点

1．2．2 酚酸类化合物的生理活性

1．2．3 酚酸类化合物的应用

1．2．4 酚酸类化合物的提取及分离方法

1．3 逆流色谱

1．3．1 逆流色谱简介

1．3．2 逆流色谱分离原理

1．3．3 pH-区带逆流色谱简介

1．4 选题目的

1．5 课题的主要研究内容

第二章 pH-区带逆流色谱分离燕麦麸皮中酚酸类物质的研究

2．1 实验材料、仪器及试剂

2．1．1 实验材料

2．1．2 实验仪器

2．1．3 实验试剂

2．2 实验内容

2．2．1 燕麦麸皮的前处理

2．2．2 大孔树脂的预处理

2．2．3 燕麦麸皮中酚酸类物质的提取方法

2．2．4 燕麦麸皮提取物的预处理

2．2．5 建立七种酚酸标准品和燕麦麸皮提取物的液相方法

2．2．6 七种酚酸标准物质的标准曲线建立

2．2．7 pH-区带逆流色谱溶剂体系的选择

2．2．8 pH-区带逆流色谱分离过程

2．3 结果与讨论

2．3．1 七种酚酸标准品液相色谱检测方法的优化

2．3．2 七种酚酸标准品的标准曲线建立

2．3．3 燕麦麸皮提取物的HPLC图

2．3．4 大孔树脂处理后的燕麦麸皮粗品HPLC图

2．3．5 溶剂体系的选择

2．3．6 保留酸与洗脱碱浓度的选择

2．3．7 pH-区带逆流色谱其他条件的优化

2．3．8 pH-区带逆流色谱分离燕麦麸皮中的酚酸

2．4 小结

第三章 pH-区带逆流色谱分离甘蔗皮中酚酸类物质的研究

3．1 实验材料、仪器及试剂

3．1．1 实验材料

3．1．2 实验仪器

3．1．3 实验试剂

3．2 实验内容

3．2．1 样品的前处理

3．2．2 甘蔗皮中酚酸类物质提取方法的选择

3．2．3 建立五种酚酸和甘蔗皮粗提物的HPLC方法

3．2．4 五种酚酸标准曲线的建立

3．2．5 pH-区带逆流色谱溶剂的选择

3．2．6 pH-区带逆流色谱分离甘蔗皮粗品

3．3 实验结果与讨论

3．3．1 五种酚酸标准品的HPLC方法建立

3．3．2 建立四种酚酸标准品的标准曲线

3．3．3 甘蔗皮中酚酸类物质的提取方法选择

3．3．4 逆流色谱溶剂体系的选择

3．3．5 pH-区带逆流色谱分离甘蔗皮中的酚酸

3．4 小结

第四章 结论与展望

4．1 结论

4．2 创新点

4．3 展望

参考文献

研究成果及发表的学术论文

致谢

作者及导师简介