从中药BS中寻找作用于gp41的HIV融合抑制剂的先导化合物

摘要

美国疾病控制中心于1981年在美国首先发现获得性免疫缺陷综合症(acquired immunodeficiency syndrome，AIDS)，此后20多年，艾滋病在全世界迅速蔓延，已有3000多万人死于艾滋病。 目前已获准上市的HIV感染治疗药物主要以病毒的逆转录酶和蛋白酶为靶点，具有易产生耐药性、毒副作用强以及价格贵的缺点。寻找作用于HIV新靶点的药物就具有特别重要的意义。本实验主要开展作用于阻断病毒进入细胞的gp41靶点药物的研究。 本研究采用天然药物化学技术与BIA(Biomolecular Interaction Analysis)技术以及体外药效学检测相结合的方法，有针对性地从天然药物BS中提取、分离和纯化有效成分，并通过波谱学的手段对有效单体化合物的结构进行了鉴定。药物提取和分离部分的主要实验方法包括薄层层析(Thin-Layer Chromatography，TLC)、高效液相色谱(High Performance Liquid Chromatography，HPLC)技术和柱层析(Colunln Chromatography)，生物活性部分的检测方法主要包括BIA技术和细胞培养，其中细胞培养使用的细胞株为MT-4细胞和MAGI细胞，病毒株为HIV-1 ⅢB，主要实验方法包括p24法、MTT法和MAGI-Assav。通过实验得出结论：BS的60％乙醇提取物在MT-4细胞中比其它浓度的乙醇提取物抗HIV-1作用更好，并以BIA技术和药效学检测作为指标，跟踪提取分离得到了先导化合物R41，并以BIA技术和MAGI-Assay对其进行了初步的作用机理的研究。 本课题采用多种技术相结合的手段，突破了传统的药物研发方法，能较快速地找到针对新靶点的先导化合物，为寻找抗HIV的新药开辟了新途径。

目录

文摘

英文文摘

声明

第1章绪论

1.1课题背景与意义

1.2抗HIV-1药物的研究进展

1.3作用于GP41的HIV-1融合抑制剂的研究进展

1.3.1 gp41的结构特征和融合特性

1.3.2融合抑制剂及其抑制机理

1.3.3从天然药物中寻找作用于gp41的融合抑制剂先导化合物

小结

第2章中药BS中先导化合物的提取、分离

2.1实验材料

2.1.1药物

2.1.2仪器

2.1.3其他材料

2.2实验方法和结果

2.2.1中药BS先导化合物的提取、分离流程图

2.2.2实验结果

第3章中药BS中先导化合物的药理研究

3.1实验材料

3.1.1细胞株

3.1.2病毒株

3.1.3药物及其制备

3.1.4仪器

3.1.5其他试剂

3.2实验方法

3.2.1 BIA技术快速追踪检测提取物与HIV gp41蛋白的结合情况

3.2.2 MTT法确定提取物的最大无毒剂量

3.2.3 P24法检测提取物的体外药效学情况

3.2.4 MAGI-Assay检测提取物的体外药效学情况

3.3实验结果

3.3.1活性部位的初步确定

3.3.2 BIA技术快速检测中药BS粗提物E部分与HIV gp41蛋白的结合情况

3.3.3 BS的粗提物E和A-4部分的体外药效学研究

3.3.4对E中活性部位的BIA技术追踪检测和药效学追踪研究

3.3.5 BIA技术快速检测提取物R41与HIV gp41蛋白的结合情况

3.3.6 P24法研究提取物R41和R40的体外药效学情况

3.3.7 MAGI-Assay研究先导化合物R41的体外药效学情况

3.3.8 MAGI-Assay研究确定R41作用于病毒生命周期的阶段

3.4实验讨论

3.4.1 BIA技术快速检测样品与HIV gp41的结合情况

3.4.2药物抗HIV-1体外药效学实验

3.4.3对中药BS中先导化合物R41抗HIV-1作用机理的研究

结论

参考文献

攻读博士学位期间所发表的学术论文

致谢