VHL基因突变、缺氧诱导因子α表达与非遗传性肾透明细胞癌关系的研究

摘要

本文为了探讨VHL基因突变后HIF-1α、HIF-2α与VEGF对非遗传性肾透明细胞癌(Clear cellrenal cell carcinoma-CCRCC)中微血管形成的影响、它们之间的关系及VHL基因突变和微血管密度、肿瘤病理分期和分级的关系，采用聚合酶链反应(PCR)、PCR产物直接测序及免疫组化等方法，研究了77例CCRCC及相应远离肿瘤的正常肾组织标本中VHL基因突变、HIF-1α、HIF-2α、VEGF和微血管密度(Microvessel Density-MVD)表达的情况及临床意义。研究中所有正常组织标本都未发现VHL基因突变，77例肿瘤标本中40例VHL基因突变(51.9％)。HIF-2α免疫组化染色阳性62例(80.5％)，高于HIF-1α免疫组化染色阳性51例(60.2％)，P<0.01。VEGF免疫组化染色阳性61例(77.2％)。在VHL基因突变组中HIF-1α、2 α和VEGF的阳性率(97.5％、92.5％和92.5％)均高于非突变组三者的阳性率(32.4％和67.6％和64.9％)，P均小于0.01。HIF-2α的表达与VEGF具有显著相关性，偏回归系数=4.826，P=0.003。VHL基因突变、HIF-2α和VEGF三者与MVD正相关并有显著意义(P<0.01)。HIF-1 α、2α和VEGF均阳性45例(58.4％)，其中VHL基因突变组的MVD值也高于非突变组，P=0.001。但本研究中未发现VHL基因突变及MVD与肿瘤病理分级分期的关系(P均大于0.05)。 研究发现，在非遗传性肾透明细胞癌中VHL基因突变较广泛，其突变与HIF-1α、2 α和VEGF的高表达相关，VHL基因突变、HIF-2α和VEGF的阳性表达与肿瘤内微血管密度升高正相关。另外，在CCRCC中HIF-2α的表达强于HIF-1α，并且与VEGF的关系更密切。这为肾癌的临床诊断及治疗提供了一定的理论依据。检测发现的VHL基因突变位点，临床上可对其有针对性的导入wt-VHL进行基因治疗。而抗HIF-α的治疗途径则可望提高肾癌的治疗效果，为肾癌的治疗开辟了一条新路。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英文缩写词语对照

绪 论

文献综述

序言

一、VHL基因研究进展

1.VHL病与VHL基因

2.VHL基因和其蛋白产物的结构

3.VHL蛋白的功能

4.VHL基因与非遗传性肾细胞癌

二、缺氧诱导因子研究进展

1.HIF的蛋白和基因结构

2.HIF的分布及活性调节

3.HIF与肿瘤发生相关的功能

三、VHL基因、HIF-α、VEGF与肿瘤微血管的生成

1.VEGF的结构和功能

2.VHL基因、HIF-α、VEGF与肿瘤微血管生成的关系

四、VHL基因、HIF-α的临床应用价值

材料与方法

实验材料

一、试剂

二、主要实验仪器设备

三、临床资料

实验方法

一、主要试剂及溶液的配制

二、引物的设计

三、正常及肿瘤组织中DNA的提取

四、DNA纯度和浓度的测定

五、PCR反应

六、PCR产物纯化及DNA测序

七、正常及肿瘤组织VEGF、CD34、HIF-1 α及HIF-2 α免疫组化染色

实验结果

一、1.5％琼脂糖凝胶电泳

二、测序结果

三、免疫组化染色结果

四、统计学分析

讨 论

结 论

参考文献

附 录