大豆抗虫相关基因GmERF54及野生大豆抗虫位点qWS11候选基因的功能鉴定

目录

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摘要

缩略词表

第一章文献综述

1．1大豆抗食叶性害虫研究进展

1．1．1植物抗虫性及其分类

1．1．2我国大豆主要食叶性害虫种类

1．1．3研究大豆抗虫性的方法及指标

1．2植物应对昆虫侵害的防御方式

1．2．1直接防御

1．2．2间接防御

1．3植物激素参与抗虫防御

1．3．1茉莉酸

1．3．2水杨酸

1．3．3乙烯

1．3．4脱落酸

1．3．5植物激素串扰应答机制

1．4转录因子参与防御信号途径

1．5野生大豆抗虫资源利用

1．5．1野生大豆概述

1．5．2野生大豆抗虫研究进展

2．1AP2／ERF基因家族概述

2．2ERF亚家族基因在防御反应中的作用

2．3ERF亚家族基因在再生反应中的作用

3．1基因编辑的概念

3．2基因编辑技术发展历程

3．2．1锌指核酸酶

3．2．2转录激活样效应因子核酸酶

3．2．3规律成簇间隔短回文重复序列

3．3CRISPR基因编辑技术的发展现状

本研究目的及意义

第二章GmERF54的功能鉴定与定点突变

2．1材料与方法

2．1．1材料种植与斜纹夜蛾诱导处理

2．1．2大豆叶片DNA、RNA提取及cDNA第一链合成

2．1．3GmERF54的克隆及生物信息学分析

2．1．4GmERF54的进化分析

2．1．5GmERF54的诱导表达水平测定

2．1．6GmERF54的组织表达水平测定

2．1．7GmERF54的亚细胞定位

2．1．8大豆毛状根遗传转化实验

2．1．9大豆毛状根强迫喂养斜纹夜蛾鉴定抗虫性

2．1．10GmERF54的转录激活活性及互作蛋白分析

2．1．11GmERF54的启动子克隆与分析

2．1．12CRISPR／Cas9敲除载体构建及打靶效率检测

2．1．13大豆子叶节遗传转化实验

2．2结果与分析

2．2．1GmERF54的克隆与序列进化分析

2．2．2GmERF54的组织差异表达分析

2．2．3GmERF54的亚细胞定位

2．2．4大豆毛状根强迫喂养斜纹夜蛾鉴定抗虫性

2．2．5GmERF54的转录激活活性及互作蛋白分析

2．2．6GmERF54的启动子分析

2．2．7GmERF54敲除载体打靶效率检测

2．2．8GmERF54定点突变植株的鉴定

2．3讨论

2．3．1GmERF54可能响应JA诱导调节植物抗虫性

2．3．2GmERF54可能参与调节植物根部生长发育

第三章野生大豆抗虫位点qWS11候选基因的功能鉴定

3．1材料与方法

3．1．1候选基因表达载体构建

3．1．2候选基因转化大豆毛状根

3．1．3大豆毛状根强迫喂养斜纹夜蛾

3．2结果与分析

3．2．1野生大豆qWS11位点候选基因分析

3．2．2候选基因抗虫性鉴定

3．3讨论

全文结论

本研究主要创新之处

参考文献

附录

攻读硕士期间发表的论文

致谢