芒果苷对自发性高血压大鼠肾脏炎症损伤及MCP-1/CCR2信号通路的影响

摘要

目的:应用芒果苷对自发性高血压大鼠（SHR）进行干预，观察芒果苷对SHR肾脏炎症损伤及MCP-1/CCR2通路的影响，探究芒果苷保护肾脏炎症损伤的作用，及MCP-1/CCR2信号通路在其中的作用，进一步揭示芒果苷保护SHR靶器官炎症损伤的机制，为开发新的防治高血压病的药物提供实验依据。　　方法：　　1.芒果苷对SHR血压的影响　　以10周龄雄性Wistay-Kyoto（WKY）大鼠和自发性高血压大鼠(SHR)作为研究对象，适应性喂养1周后，将40只SHR随机分成5组（n=8）：模型组、芒果苷高剂量组（100mg·kg-1·d-1）、芒果苷中剂量组（50mg·kg-1·d-1）、芒果苷低剂量组（25mg·kg-1·d-1）和苯那普利组（10mg·kg-1·d-1）；另取8只WKY大鼠作为正常对照组。按照实验分组，给大鼠灌胃上述对应剂量的药物，模型组和WKY正常对照组灌胃等容量的蒸馏水，每组每日定时灌胃给药，1次/天，连续给药8周，每2周测量一次各组大鼠的尾动脉收缩压（SBP）。　　2.芒果苷对SHR肾脏炎症损伤的影响　　分组和给药方法同1项。灌胃给药8周毕，收集24小时尿液，取材前禁食不禁水12h后，用10%水合氯醛以4mL/kg剂量腹腔注射麻醉，大鼠处死后迅速钝性剥离肾脏组织，用滤纸吸干水分，根据各实验方法做相应处理及保存。采用HE染色法、Masson染色法及透射电镜观察SHR大鼠的肾脏形态学变化；采用ELISA法检测IL-6和TNF-α的含量；采用全自动生化仪检测尿液中β2-MG、mAlb、BUN及SCr的含量。　　3.芒果苷对SHR肾脏MCP-1/CCR2信号通路的影响　　分组和给药方法同1项。灌胃给药8周毕，取材前禁食不禁水12h后，用10%水合氯醛以4mL/kg剂量腹腔注射麻醉，大鼠处死后迅速钝性剥离肾脏组织，用滤纸吸干水分，根据各实验方法做相应处理及保存。采用Westernblot法、免疫组织化学染色法及Real-TimePCR法测定SHR大鼠肾脏MCP-1和CCR2蛋白及mRNA表达情况。　　结果：　　1.各组大鼠血压的变化　　灌胃给药8周后，与模型组比较，芒果苷高、中和低剂量组SHR尾动脉收缩压降低，有显著性差异(P＜0.01)。但芒果苷中剂量组SHR尾动脉收缩压与其给药前相比，降低幅不大，无明显生物学意义。本实验结果显示芒果苷能降低SHR血压，具有降压作用。　　2.肾脏病理学改变　　HE染色后显微镜下观察肾组织形态学改变：与正常对照组相比，模型组大鼠肾小管基膜增厚，有炎症细胞浸润，肾小球固缩；芒果苷治疗后，各剂量组能不同程度的改善上述病理改变。　　Masson染色后显微镜下观察肾组织纤维化程度：与正常对照组相比，模型组胶原纤维化严重，出现大量蓝染胶原沉积，肾小管结构不清，给予不同剂量芒果苷治疗后，与模型组比较，肾脏纤维化有不同程度的减轻。　　透射电镜实验结果显示：模型组肾脏组织损伤严重，肾小球基底膜增厚，足突细胞融合或膜结构溶解；芒果苷低、中剂量组肾脏组织尚可见足突增粗融合，有部分基底膜的厚薄仍是不均匀，但与模型组比较，肾脏组织超微结构损伤程度及范围均有所减轻；芒果苷高剂量组肾脏组织损伤明显得到改善，肾小球基膜连续、均匀，足突细胞肿胀融合现象大大减轻。　　3.芒果苷对肾脏IL-6、TNF-α表达的影响　　与WKY正常对照组比较，模型组大鼠肾脏组织中的IL-6、TNF-α含量显著升高(P＜0.01或P＜0.05)，提示实验造模成功。与模型组比较，芒果苷中剂量组大鼠肾脏组织中的IL-6含量极显著降低，差异有统计学意义(P＜0.01)，苯那普利组、芒果苷低剂量组大鼠肾脏组织中的IL-6含量及芒果苷低、中剂量组和苯那普利组大鼠肾脏组织中的TNF-α含量显著降低，差异有统计学意义(P＜0.05)，芒果苷高剂量组大鼠肾脏组织中的IL-6、TNF-α含量降低趋势；提示芒果苷可下调大鼠肾脏组织中异常升高的IL-6、TNF-α水平。　　4.芒果苷对大鼠肾功能的影响　　与WKY正常对照组比较，模型组尿液β2-MG、mAlb及BUN浓度显著升高(P＜0.01或P＜0.05)。与模型组比较，苯那普利组、芒果苷高剂量组尿液β2-MG浓度极显著降低，差异有统计学意义(P＜0.01)，芒果苷中剂量组尿液β2-MG、BUN浓度显著降低，差异有统计学意义(P＜0.05)，芒果苷低剂量组尿液β2-MG及苯那普利组、芒果苷高剂量组尿液mAlb浓度显著降低，差异有统计学意义(P＜0.05)，芒果苷中、低剂量组尿液mAlb及苯那普利组、芒果苷中、低剂量组尿液BUN有降低的趋势。芒果苷对各组尿液SCr浓度没有明显的作用(P＞0.05)。　　5.对肾脏MCP-1/CCR2信号通路的影响　　Westernblot法检测结果显示：与WKY正常对照组比较，模型组大鼠肾脏组织MCP-1、CCR2表达量显著性升高(P＜0.01)，提示实验造模成功。与模型组比较，苯那普利组、芒果苷高剂量组大鼠肾脏组织MCP-1、CCR2表达量极显著降低(P＜0.01)，芒果苷低、中剂量组大鼠肾脏组织MCP-1表达量显著降低(P＜0.05)，芒果苷低、中剂量组大鼠肾脏组织CCR2表达量有降低趋势；提示芒果苷可下调大鼠肾脏组织中异常升高的MCP-1、CCR2水平。　　免疫组化检测结果显示：与WKY正常对照组比较，模型组大鼠肾脏组织MCP-1、CCR2表达量显著升高(P＜0.01或P＜0.05)，提示造模成功。与模型组比较，苯那普利组、芒果苷低剂量组大鼠肾脏组织MCP-1含量及芒果苷低剂量组大鼠肾脏组织CCR2含量极显著降低，差异有统计学意义(P＜0.01)，芒果苷高、中剂量组大鼠肾脏组织MCP-1含量及苯那普利组、芒果苷中剂量组大鼠肾脏组织CCR2含量显著降低(P＜0.05)，芒果苷高剂量组大鼠肾脏组织CCR2表达量有降低趋势；提示芒果苷可下调大鼠肾脏组织中异常升高的MCP-1、CCR2水平。　　Real-TimePCR检测结果显示：与WKY正常对照组比较，模型组大鼠肾脏组织MCP-1和CCR2mRNA含量显著升高(P＜0.05或P＜0.01)，提示造模成功。与模型组比较，苯那普利组大鼠肾脏组织MCP-1及芒果苷高剂量组大鼠肾脏组织CCR-2mRNA含量极显著降低(P＜0.01)，芒果苷低剂量组大鼠肾脏组织MCP-1及苯那普利组、芒果苷低剂量组大鼠肾脏组织CCR2mRNA含量有显著降低，差异有统计学意义(P＜0.05)，芒果苷中、高剂量组大鼠肾脏组织MCP-1及芒果苷中剂量组大鼠肾脏组织CCR2mRNA含量有降低趋势；实验结果表明芒果苷可下调大鼠肾脏组织中异常升高的MCP-1、CCR2水平。　　结论：芒果苷能降低血压，对肾脏炎症损伤具有保护作用，其机制可能与其能调控MCP-1/CCR2信号通路发挥免疫炎症抑制作用有关。

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