低pH下生产苹果酸黑曲霉工程菌株的构建

目录

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摘要

1前言

1．1．1苹果酸的简介

1．1．2苹果酸的应用

1．1．3苹果酸的生产现状

1．2．1黑曲霉简介

1．2．2黑曲霉产苹果酸机制

1．3．1丝状真菌的遗传转化方法

1．3．2丝状真菌转化的筛选标记

1．4丝状真菌中的基因改造

1．4．1丝状真菌中基因的敲除

1．4．2丝状真菌中基因的表达

1．4．3位点特异性重组系统

1．5．1本论文研究意义

1．5．2本论文的研究内容

2材料与方法

2．1实验材料

2．1．1实验所用菌株

2．1．2实验所用质粒

2．1．3实验用引物

2．1．4实验用仪器

2．1．5实验用试剂

2．1．6实验用培养基

2．1．7实验用溶液

2．2实验方法

2．2．1黑曲霉核酸的提取

2．2．2琼脂糖凝胶电泳

2．2．3大肠杆菌的化学转化

2．2．4质粒的构建

2．2．5农杆菌介导的黑曲霉转化

2．2．6标记基因的重组

2．2．7摇瓶发酵及苹果酸分析

3结果与讨论

3．1副产物的消除

3．1．1草酸的消除

3．1．2柠檬酸的消除

3．2代谢通路的重构以及转运的加强

3．2．1pexG基因的敲除

3．2．2胞质苹果酸合酶的表达

3．2．3苹果酸转运蛋白的表达

3．2．4胞质异柠檬酸裂解酶的表达

3．2．5柠檬酸裂解酶的表达

3．2．6胞质顺乌头酸酶的表达

3．3构建菌株苹果酸产量分析

4结论

4．1全文总结

4．2本论文的创新点

4．3本论文的不足之处

5展望

参考文献

7攻读硕士学位期间发表论文情况

致谢