尿苷--胞苷激酶偶联聚磷酸激酶催化制备尿苷酸的研究

目录

声明

摘要

1．1尿苷酸分子结构及理化性质

1．2尿苷酸的用途

1．3尿苷酸生产技术

1．3．1核酸水解法

1．3．2化学合成法

1．4尿苷-胞苷激酶

1．5ATP再生系统研究进展

1．5．1ATP再生系统

1．5．2聚磷酸激酶用于ATP再生

1．6原位纯化固定化酶技术

1．7．1论文立题背景

1．7．2论文主要研究内容

2材料与方法

2．1．1菌株

2．1．2质粒

2．1．3引物

2．2．1主要仪器

2．2．2主要试剂

2．2．3主要溶液

2．2．4主要培养基

2．3．1目的基因的获取

2．3．2重组菌株的构建

2．3．3培养方法

2．3．4重组酶的纯化及固定化方法

2．3．5分析检测方法

3结果与讨论

3．1．1不同来源尿苷-胞苷激酶工程菌的构建

3．1．2重组尿苷-胞苷激酶表达与鉴定

3．1．4尿苷-胞苷激酶对磷酸供体的选择性

3．1．5UK5蛋白的生物信息学分析

3．2双酶偶联反应体系的建立

3．2．1不同来源聚磷酸激酶工程菌的构建

3．2．2重组聚磷酸激酶表达与鉴定

3．2．3使用聚磷酸激酶用于ATP的再生

3．3双酶偶联反应条件的优化

3．3．1温度对双酶偶联反应的影响

3．3．2pH对双酶偶联反应的影响

3．3．3酶配比对双酶偶联反应的影响

3．3．4尿苷浓度对双酶偶联反应的影响

3．3．5M92+浓度对双酶偶联反应的影响

3．3．6六偏磷酸钠浓度对双酶偶联反应的影响

3．3．7ATP浓度对双酶偶联反应的影响

3．4尿苷发酵结合酶催化制备尿苷酸

3．5原位纯化固定化酶用于多批次催化制备尿苷酸

4结论

4．1全文总结

4．2论文的创新点

4．3论文的不足之处

5展望

参考文献

7攻读硕士学位期间发表论文情况

致谢