对虾白斑杆状病毒(White spot bacilliform virus,WSBV)基因结构与功能及其分子检测

摘要

该文利用DNA重组等分子生物学技术,在WSBV基因结构与功能研究的同时,建立特异简便的检测方法--酶联免疫吸附测定(ELISA)和荧光PCR技术,以期为对虾白斑杆状病毒的防治提供科学依据.从该实验室构建的对虾白斑杆状病毒cDNA文库和DNA文库中,通过筛选、测序和序列分析,获得2个对虾白杆状病毒的编码基因:DNA结合蛋白基因(命名为p6.8基因)和可能编码结构蛋白新基因(命名为p204基因).比较了对虾白斑杆状病毒和昆虫杆状病毒DNA结合蛋白基因及其编码产物的结构,p6.8基因与昆虫杆状病毒DNA结合蛋白基因具有较高的同源性,它们编码多肽的一级结构、二级结构及新疏水性都很相似.该文建立的对虾白斑杆状病毒ELISA检测方法,是首次利用WSBV的基因表达产物制备的抗体,通过基因表达及表达产物的纯化可获得大量的抗体.将对虾白斑杆状病毒的一段特异性DNA设计成分子信标探针,用于该病毒的PCR检测.温度与荧光强度之间的关系表明,所设计探针的发夹既可以形成也可以打开,符合PCR对分子信标探针的要求.结果表明,在PCR同时加入分子信标探针不影响PCR扩增,分子信标探针只能与目的DNA杂交,具有较高的特异性.随着PCR循环数的增加以及含目的DNA的质粒拷贝数增加,荧光强度都随之增强.

目录

文摘

英文文摘

致谢

第一章文献综述

1对虾白斑杆状病毒及其分子生物学

1.1对虾病毒的类型

1.2对虾白斑杆状病毒的发现

1.3对虾白斑杆状病毒的形态结构和组织病理学

1.4对虾白斑杆状病毒的感染过程

1.5对虾白斑杆状病毒的分子生物学

2对虾白斑杆状病毒的检测

2.1对虾白斑杆状病毒的检测

2.2分子信标探针的研究进展

3昆虫杆状病毒的分子生物学

3.1概述

3.2昆虫杆状病毒的基因结构与功能

3.3病毒基因中的小顺反子及其作用

第二章对虾白斑杆状病毒DNA结合蛋白基因的结构与功能

材料与方法

结果与分析

1 C36的开放阅读框

2p6.8基因的结构分析

3p6.8基因与昆虫杆状病毒DNA结合蛋白基因的同源性比较

4p6.8编码碱性多肽与昆虫杆状病毒DNA结合蛋白的二级结构及亲疏水性比较

5p6.8基因的表达

6p6.8基因表达产物的提取

7p6.8基因表达产物的凝胶迁移率变动分析

讨论

1对虾白斑杆状病毒的DNA结合蛋白

2p6.8基因的转录产物

3p6.8基因编码多肽的DNA结合功能

小结

第三章对虾白斑杆状病毒一个新基因的结构及其小顺反子

材料与方法

结果与分析

1p204基因的筛选

2p204基因的结构分析

3p204基因编码多肽的二级结构及亲疏水性

4p204基因的功能分析

5p204基因的表达

6204基因表达产物的分离纯化

7对虾白斑杆状病毒204基因的小顺反子及其表达

讨论

1p204基因的功能

2小顺反子对p204基因的影响

小结

第四章对虾白斑杆状病毒的分子检测

4.1分子信标探针在对虾白斑杆状病毒PCR检测中的应用

材料与方法

结果与分析

讨论

小结

4.2对虾白斑杆状病毒重组蛋白的酶联免疫吸附检测(ELISA)

材料与方法

结果与分析

讨论

小结

参考文献

附录1常用缩写词

附录2质粒图谱

攻读学位期间发表的论文