调控细胞核及着丝粒蛋白质-蛋白质相互作用的动力学研究

摘要

本文对调控细胞核及着丝粒蛋白质-蛋白质相互作用进行了动力学研究。为了阐明Zwint-1与ZW10在动点上的天然相互作用和它们在纺锤体检查点信号转导中的作用，本文首先用生化方法证实Zwint-1与ZW10的N端80个氨基酸存在相互作用。在HeLa细胞中表达ZW10的突变体显示ZW10定位于动点，说明与Zwint-1的相互作用区域就可以将ZW10定位在动点上。其次RNA干扰结果显示抑制Zwint-1的合成干扰了ZW10的动点定位，表明Zwint-1将ZW10定位于动点。同时，Zwint-1的表达被抑制后并不引起细胞停留在有丝分裂期，而是引起了早熟染色体分离。本研究证明Zwint-1在动点的动态性组装过程中起着关键的作用。抑制Zwint-1干扰了ZW10，CENP-F和dynamitin定位于动点，中止了nocodazole引起的有丝分裂期停留，同时诱导了带有染色体桥的细胞早熟地从后期走出有丝分裂，从而产生了带有异倍体核的子代细胞。由于Zwint-1和ZW10在酵母中是不保守的，只在后生动物中才存在，因此，本研究成功地说明后生动物中进化出了一套更为精细的纺锤体检查点机制，从而保证有丝分裂染色体分离的精确性。

目录

文摘

英文文摘

缩略词表

第一部分ZW10和Zwint-1蛋白质复合体的细胞生物学研究

文献综述

一、动点结构与组装

二、动点与微管黏附及染色体运动

三、纺锤体检查点调控

四、动点蛋白ZWint-1和ZW10的研究现状

材料和方法

实验结果与讨论

1.Zw10通过其N端与Zwint-1相互作用

2.与Zwint-1的结合区域对于ZW10定位动点是必需的

3.Zwint-1是ZW10定位动点的充要条件

4.Zwint-1对于CENP-F和Dynamitin定位动点是必需的

5.Zwint-1是保证染色体分离保真性的纺锤体检查点组分

小结及展望

参考文献

第二部分组蛋白乙酰转移酶Tip60的Sumo-1修饰及功能研究

文献综述

一、SUMO蛋白修饰及功能

一、SUMO蛋白修饰及功能 (一)、SUMO蛋白家族

一、SUMO蛋白修饰及功能 (二)、SUMO结合与去结合的机制

一、SUMO蛋白修饰及功能 (三)、SUMO化修饰的功能

一、SUMO蛋白修饰及功能 (四)、SUMO化修饰的作用机制

一、SUMO蛋白修饰及功能 (五)、小结和展望

二、组蛋白乙酰化转移酶(Histone Acetyltransferases，HATs)

三、Tip60的研究现状

材料和方法

实验结果与讨论

1.Tip60的体内和体外SUMO化

2.SUMO化Tip60定位到PML NBs，UV照射可增强定位

3.Tip60非SUMO化突变体的定位

4.SUMO化稳定了UV和MG132共处理后Tip60的PMLNBs定位

5.Mdm2对于Tip60的核仁招募是必需的

6.Tip60招募核仁的机制

7.Tip60的SUMO化是DNA损伤反应所必需

8.Tip60通过p53路径参与DNA损伤反应

9.Tip60的SUMO化修饰的功能模型

小结与展望

参考文献

附录

致谢