肝细胞核因子相互作用蛋白质的研究

摘要

肝细胞核因子(HNF)是一群在肝脏中富集表达的转录因子，调控多种肝脏基因的特异表达，并参与维系肝脏的正常表型与功能。HNFs在调控基因转录的过程中需要募集多种辅助因子协同发挥作用。本研究对HNFs主要成员的蛋白质复合体进行了分离鉴定，并对HMG1-HNF1α相互作用介导的生物学功能及作用机制进行了深入的研究。 研究采用免疫共沉淀联合质谱分析分离鉴定了HNF1α、HNF3α、HNF3β、HNF4α以及HNF6的相互作用候选分子，建立了一套相对标准化的流程，分别从亚细胞定位、蛋白质结构域、生物学功能以及相关数据库检索四个方面对候选分子与靶蛋白之间的相互作用进行可靠性评价。在所获得的67个相互作用数据中，有37个分子与靶蛋白具有共同的亚细胞定位(56％)，有19个分子与靶蛋白具有直接相互作用的结构域(28％)，有29个分子能够参与转录调控过程(43％)，有42个分子与靶蛋白之间存在间接相互作用(62％)。这些结果表明，我们获得的蛋白质相互作用数据具有较高的可信度。进一步通过免疫共沉淀实验，我们验证了HMG1、14-3-3zeta、CBX3以及RANBP1四种蛋白质与HNF1α的相互作用，采用报道基因实验证明这四种蛋白质可以影响HNF1α的转录活性，为揭示HNF1α转录调控的作用机制提供了有价值的线索。 采用免疫共沉淀、GST沉降手段验证了HMG1与HNF1α之间的相互作用，并确定HMG1的HMG盒结构域与HNF1α的同源结构域为两者相互作用发生的区段，荧光素酶报道基因实验证明HMG1能够增强HNF1α的转录活性，EMSA实验证明HMG1增强了HNF1α的DNA结合活性，并证明HMG1的调控作用需要其结构中的2个HMG盒结构域同时存在。RNAi下调HMG1的表达，可以改变HNF1α下游靶基因的表达，表明HMG1-HNF1α的相互作用可能具有重要的生理意义，并可能在肝脏、胰腺等疾病的发生、发展中起作用。

目录

论文说明：英文缩略词

声明

主要仪器设备和常用试剂的配制

前 言

第一部分肝细胞核因子相互作用蛋白质的分离鉴定

一、材料与方法

二、结果

三、讨论

第一部分参考文献

第二部分HMG1通过稳定HNF1α的二聚体结构增强HNF1α的转录活性

一、材料与方法

二、结果

三、讨论

第二部分参考文献

总结

致谢

附录

在读期间发表和投稿文章、申请和承担的课题