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摘要
符号说明
1．1丝状真菌里氏木霉
1．1．1里氏木霉—纤维素酶生产菌株
1．1．2里氏木霉—蛋白表达分泌系统
1．2丝状真菌胞外蛋白酶
1．2．2胞外蛋白酶表达调控
1．3内质网压力响应
1．3．1内质网未折叠蛋白响应(UPR)
1．3．2内质网相关蛋白降解(ERAD)
1．3．3蛋白折叠监护元件Slp1-Emp65复合物
1．4本论文研究意义及主要研究内容
1．4．1研究意义
1．4．2主要研究内容
第二章里氏木霉胞外蛋白酶分泌规律研究
2．1材料与方法
2．1．1菌株
2．1．2主要实验仪器和试剂
2．1．3主要培养基和培养条件
2．1．4分子生物学操作方法
2．1．5蛋白酶活力测定
2．1．6蛋白质谱鉴定
2．1．7生物信息学软件及分析
2．2实验结果与分析
2．2．1脱脂奶粉平板上里氏木霉胞外蛋白酶的分泌情况
2．2．2明胶酶谱分析里氏木霉胞外蛋白酶活力
2．2．3里氏木霉胞外蛋白酶活力测定
2．2．4使用蛋白酶抑制剂分析里氏木霉胞外蛋白酶种类
2．2．5质谱鉴定里氏木霉胞外蛋白酶
2．3本章小结
第三章里氏木霉低蛋白酶背景分泌系统构建
3．1材料与方法
3．1．1菌株和质粒
3．1．2本章所用PCR引物
3．1．3主要实验仪器和试剂
3．1．4主要培养基和培养条件
3．1．5分子生物学操作方法
3．1．6黑曲bglA过表达盒构建
3．1．7里氏木霉遗传转化
3．1．8转化子的筛选鉴定
3．1．9纤维素酶活力测定及蛋白酶活力测定
3．2实验结果与分析
3．2．2里氏木霉Vib1缺失菌株的生长分析
3．2．3构建BGLA表达菌株
3．2．4里氏木霉BGLA表达菌株SDS-PAGE检测
3．2．5参与UPR及ERAD途径相关基因的表达量检测
3．3本章小结
第四章里氏木霉蛋白折叠监护元件SE复合物功能初探
4．1材料与方法
4．1．1菌株和质粒
4．1．2本章所用PCR引物
4．1．3主要实验仪器和试剂
4．1．4主要培养基和培养条件
4．1．5分子生物学操作方法
4．1．6里氏木霉蛋白折叠监护元件SE复合物突变菌株构建
4．1．7里氏木霉遗传转化
4．1．8转化子的筛选鉴定
4．2实验结果与分析
4．2．1里氏木霉SE复合物突变菌株构建及PCR验证
4．2．2里氏木霉SE复合物突变菌株Southern验证
4．2．3不同浓度DTT处理对SE复合物突变菌株生长的影响
4．2．4SE复合物突变菌株纤维素酶分泌能力分析
4．2．5SE复合物突变菌株发酵过程内质网压力检测
4．2．6内质网驻留GFP表达菌株构建及PCR验证
4．2．7内质网驻留GFP表达菌株荧光量测定
4．2．8内质网驻留GFP表达菌株内质网压力检测
4．3本章小结
全文总结
参考文献
致谢
附录
山东大学;
