二甲双胍灌胃对支气管哮喘小鼠气道重塑的影响及机制探讨

摘要

目的：　　观察二甲双胍灌胃对慢性哮喘小鼠气道重塑的影响并探讨其机制　　方法：　　将30只清洁级C57BL/6雌性小鼠随机分为3组，每组10只，分别为对照组，模型组，二甲双胍组。其中模型组及二甲双胍组于实验第0、7、14天采用腹腔注射的方式予以100ugOVA（卵清蛋白）+2mg氢氧化铝致敏。并在第21-60天采用50ugOVA3次/周滴鼻激发建立慢性哮喘模型。在对照组中则采用等量的NS（生理盐水）腹腔注射致敏以及滴鼻激发。从第21天开始，按照二甲双胍300mg/Kg/天给予二甲双胍组小鼠灌胃处理，而对照组跟模型组则用等量生理盐水行灌胃处理。末次滴鼻激发24小时内，采用眼球摘除法取血。通过ELISA检测各组小鼠血清中TGF-β1、MMP-9、TIMP-1含量。三组小鼠在眼球摘除取血后，均采用脱颈椎法处死。处死后取出各组小鼠左肺下叶，将其于4％多聚甲醛溶液中固定行masson染色。在masson染色的基础下采用Image-Pro Plus(6.0)图像分析系统观察胶原蛋白在气道基底膜下沉积情况、支气管壁厚度以及平滑肌细胞厚度。取出小鼠右肺，固定于4％多聚甲醛溶液中以行RT-PCR检测各组小鼠肺组织中MMP-9mRNA、TIMP-1mRNA表达情况。　　结果：　　1.一般情况观察　　模型组哮喘小鼠精神食欲均欠佳，毛发脏乱，少动，体重减轻。在滴鼻激发后，模型组可看到小鼠烦躁、呼吸频率加快、嘴唇粘膜紫绀、球结膜水肿及偶伴喷嚏，有时还可见小鼠在咳嗽喷嚏时出现大小便失禁。对照组精神食欲良好，体重稍增加，小鼠在滴鼻后偶出现呛咳，但未出现烦躁、呼吸频率加快、喷嚏、嘴唇粘膜紫绀、球结膜水肿及大小便失禁等情况。二甲双胍干预组小鼠同样出现烦躁、呼吸频率加快、喷嚏、嘴唇粘膜紫绀、球结膜水肿等，但较模型组有所减轻，偶见小鼠大小便失禁。　　2.二甲双胍减轻支气管哮喘小鼠气道病理变化　　模型组小鼠见支气管管壁增厚，气道粘膜上皮增生，气管内粘液渗出，肺泡结构破坏等明显。二甲双胍组上述改变较模型组明显减轻。而对照组支气管、肺泡等结构相对完整。　　3.二甲双胍减轻支气管哮喘小鼠气道基底膜下胶原蛋白沉积、支气管壁及平滑肌细胞厚度　　4.二甲双胍下调支气管哮喘小鼠血清TGF-β1、MMP-9及TIMP-1的水平　　与对照组相比较，模型组及二甲双胍组小鼠血清TGF-β1、MMP-9及TIMP-1的水平明显增加(p＜0.05)。与模型组相比较，二甲双胍组小鼠血清TGF-β1水平、血清MMP-9及TIMP-1的水平显著下降(p＜0.05)。　　5.二甲双胍减轻支气管哮喘小鼠肺组织中MMP-9mRNA、TIMP-1mRNA表达　　与对照组相比较，模型组及二甲双胍组小鼠肺组织中MMP-9mRNA、TIMP-1mRNA表达显著增加(p＜0.05)。与模型组相比较，二甲双胍组小鼠组织中MMP-9mRNA、TIMP-1mRNA表达明显下降(p＜0.05)。　　结论：　　1.OVA可以诱导慢性支气管哮喘小鼠模型的形成，并导致哮喘小鼠血清中TGF-β1、MMP-9、TIMP-1水平的升高以及肺组织中MMP-9mRNA、TIMP-1mRNA表达的增加。　　2.二甲双胍能够通过下调支气管哮喘小鼠血清TGF-β1、MMP-9及TIMP-1水平，并降低MMP-9mRNA、TIMP-1mRNA在支气管小鼠肺组织中的表达。进而减轻支气管哮喘小鼠的气道重塑程度。

目录

摘要

前言

1、支气管哮喘概述

2、气道慢性炎症与哮喘

3 气道重塑与支气管哮喘

4 二甲双胍与支气管哮喘

材料与方法

1 实验材料和实验仪器

2 主要实验溶液的配制

3．主要实验仪器

4．实验方法

5 统计方法

结果

1 小鼠一般情况

2 肺组织病理学变化

3 masson染色测量气道基底膜下胶原纤维蛋白沉积比

4 支气管壁及平滑肌厚度测量

5 小鼠血清ELISA检测TGF-β1、MMP-9及TIMP-1结果

6 肺组织中RT-PCR检测MMP-9mRNA及TIMP-1mRNA表达结果

讨论

1 TGF-β1与支气管哮喘

2 基金属蛋白酶(MMPs)、金属蛋白酶抑制剂(TIMPs)与支气管哮喘

结论

参考文献

英汉缩略词译表

致谢

二甲双胍在肺部疾病中的研究现状 综述

声明