声明
第1章 绪论
1.1 表观遗传学概念
1.2 组蛋白及组蛋白变体
1.2.1 组蛋白变体的定义及种类
1.2.2 组蛋白变体改变染色质的结构
1.2.3 组蛋白变体的功能及生理意义
1.2.4 组蛋白变体在癌症发展中的影响
1.2.5 组蛋白变体H2A.Z
1.3 染色质重塑酶及组蛋白分子伴侣
1.3.1 染色质重塑
1.3.2 组蛋白分子伴侣
1.3.3 染色质重塑酶
1.4 DNA-PK复合物及核心亚基DNA-PKcs
1.4.1 DNA-PK复合物及核心亚基DNA-PKcs的结构
1.4.2 DNA-PK复合物在DNA损伤修复中的作用
1.4.3 DNA-PK和DNA-PKcs的生理功能及作用
1.4.4 DNA-PK和DNA-PKcs与癌症发生发展的关系
第2章 材料与方法
2.1 实验设备与材料
2.1.1 实验设备
2.1.2 实验材料
2.2 实验方法
2.2.1 体外重组核小体
2.2.2 体外核小体置换实验
2.2.3 细胞培养及传代
2.2.4 质粒构建
2.2.5 慢病毒包装与感染
2.2.6 染色质抽提实验
2.2.7 免疫荧光染色
2.2.8 免疫印迹（Western blot）实验
2.2.9 CCK8 实验
2.2.10 细胞周期同步化
2.2.11 流式细胞分析
第3章 实验结果与分析
3.1 建立体外组蛋白变体H2A.Z置换酶活性检测体系
3.1.1 体外重组核小体和H2A.Z-H2B二量体
3.1.2 建立体外组蛋白变体H2A.Z置换酶活性检测体系
3.2 纯化含有DNA-PKcs的蛋白组分或复合物
3.2.1 从HeLa细胞中分离纯化含有DNA-PKcs的蛋白组分
3.2.2 在HEK293T细胞中一过性表达和免疫纯化Flag-DNA-PKcs蛋白
3.3 比较DNA-PKcs蛋白组分与YL1/SRCAP的H2A.Z置换酶活性
3.3.1 考马斯亮蓝染色比较SW-4000 #34与YL1/SRCAP中的蛋白含量
3.3.2 免疫印迹法比较SW-4000 #34与YL1/SRCAP复合物中的蛋白含量
3.3.3 比较SW-4000 #34与YL1/SRCAP复合物的H2A.Z置换酶活性
3.4 结果与讨论
3.5 DNA-PKcs敲低质粒的构建及敲低效果的检测
3.5.1 DNA-PKcs敲低质粒的构建
3.5.2 shDNA-PKcs在HEK293T细胞中的敲低效果
3.5.3 shDNA-PKcs在HeLa细胞中的敲低效果
3.5.4 Plvx-zs-Green-shPKcs在HeLa和HEK293T细胞中转染效率的比较
3.6 稳定敲低DNA-PKcs细胞系的建立
3.6.1 Plvx-zsGreen-shRNA质粒在不同细胞中的转染效率比较
3.6.2 包装病毒感染效率的条件摸索
3.6.3 DNA-PKcs稳敲细胞系的筛选
3.7 DNA-PKcs的生物学功能初步探讨
3.7.1 DNA-PKcs对HeLa细胞增殖的影响
3.7.2 shDNA-PKcs对细胞分裂的影响
3.7.3 shDNA-PKcs对细胞周期的影响
3.8 敲低DNA-PKcs对内源H2A.Z在染色质上的募集影响
3.9 结果与讨论
第4章 总结与展望
参考文献
作者简介及在攻读硕士学位期间所取得的科研成果
致谢
吉林大学;
