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摘要
中英文缩略词表
1前言
2材料和方法
2.1材料
2.1.1组织
2.1.2细胞株和菌株
2.1.3动物来源
2.1.4质粒载体
2.1.5引物
2.1.6主要试剂耗材
2.1.7主要仪器设备
2.1.8主要实验试剂配制
2.2实验方法
2.2.1 qRT-PCR检测骨肉瘤组织及其癌旁组织中hsa_circ_0000530、miR-198和CDK6 mRNA的表达水平
2.2.2 免疫印迹(Western Blot)检测骨肉瘤组织及其癌旁组织中CDK6的表达
2.2.3 细胞培养
2.2.4测序鉴定骨肉瘤细胞中存在hsa_circ_0000530,验证其反向剪接位点
2.2.5 qRT-PCR检测人正常成骨细胞及骨肉瘤细胞中hsa_circ_0000530、miR-198和CDK6 mRNA的表达水平
2.2.6Western Blot检测人正常成骨细胞及骨肉瘤细胞中蛋白表达
2.2.7细胞转染
2.2.8CCK-8检测细胞活性
2.2.9流式细胞术细胞周期检测
2.2.10划痕实验检测细胞迁移
2.2.11Transwell检测细胞迁移和侵袭
2.2.12生物信息学预测
2.2.13双荧光素酶报告实验验证miR-198与hsa_circ_0000530及CDK6的3’UTR的结合
2.2.14hsa_circ_0000530 siRNA慢病毒感染细胞并筛选稳定细胞株
2.2.15裸鼠皮下成瘤实验
2.2.16统计学分析
3实验结果
3.2 hsa_circ_0000530、miR-198和CDK6在骨肉瘤组织及骨肉瘤细胞中的表达
3.2.2 hsa_circ_0000530、miR-198和CDK6在骨肉瘤细胞中的表达
3.3敲低hsa_circ_0000530对MG63、U2OS细胞中hsa_circ_0000530、miR-198和CDK6表达的影响
3.4敲低hsa_circ_0000530对骨肉瘤细胞增殖、细胞周期、迁移、侵袭及体内裸鼠成瘤的影响
3.4.3敲低hsa_circ_0000530对MG63和U2OS细胞迁移和侵袭的影响
3.4.4体内裸鼠成瘤实验检测敲低hsa_circ_0000530对MG63细胞皮下成瘤能力的影响
3.5.1 生物信息学预测hsa_circ_0000530、miR-198和CDK6之间的匹配结合位点
3.5.2构建双报告载体
3.5.3 双荧光素酶报告基因实验验证hsa_circ_0000530/miR-198/CDK6有相互匹配结合位点,三者之间可能存在调节轴关系
3.6转染miR-198 mimics对骨肉瘤细胞中miR-198和CDK6表达的影响
3.7.2过表达miR-198对MG63和U2OS细胞周期进程的影响
3.7.3过表达miR-198对MG63和U2OS细胞迁移和侵袭的影响
3.8.2 共转染hsa_circ_0000530 siRNA和miR-198 inhibitor对MG63、U2OS细胞增殖、细胞周期、迁移和侵袭的影响
4讨论
5结论
参考文献
综述
个人简历
致谢
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