声明
摘要
中英文缩略词表
1前言
2材料和方法
2．1材料
2．1．1组织
2．1．2细胞株和菌株
2．1．3动物来源
2．1．4质粒载体
2．1．5引物
2．1．6主要试剂耗材
2．1．7主要仪器设备
2．1．8主要实验试剂配制
2．2实验方法
2．2．1 qRT-PCR检测骨肉瘤组织及其癌旁组织中hsa_circ_0000530、miR-198和CDK6 mRNA的表达水平
2．2．2 免疫印迹(Western Blot)检测骨肉瘤组织及其癌旁组织中CDK6的表达
2．2．3 细胞培养
2．2．4测序鉴定骨肉瘤细胞中存在hsa_circ_0000530，验证其反向剪接位点
2．2．5 qRT-PCR检测人正常成骨细胞及骨肉瘤细胞中hsa_circ_0000530、miR-198和CDK6 mRNA的表达水平
2．2．6Western Blot检测人正常成骨细胞及骨肉瘤细胞中蛋白表达
2．2．7细胞转染
2．2．8CCK-8检测细胞活性
2．2．9流式细胞术细胞周期检测
2．2．10划痕实验检测细胞迁移
2．2．11Transwell检测细胞迁移和侵袭
2．2．12生物信息学预测
2．2．13双荧光素酶报告实验验证miR-198与hsa_circ_0000530及CDK6的3’UTR的结合
2．2．14hsa_circ_0000530 siRNA慢病毒感染细胞并筛选稳定细胞株
2．2．15裸鼠皮下成瘤实验
2．2．16统计学分析
3实验结果
3．2 hsa_circ_0000530、miR-198和CDK6在骨肉瘤组织及骨肉瘤细胞中的表达
3．2．2 hsa_circ_0000530、miR-198和CDK6在骨肉瘤细胞中的表达
3．3敲低hsa_circ_0000530对MG63、U2OS细胞中hsa_circ_0000530、miR-198和CDK6表达的影响
3．4敲低hsa_circ_0000530对骨肉瘤细胞增殖、细胞周期、迁移、侵袭及体内裸鼠成瘤的影响
3．4．3敲低hsa_circ_0000530对MG63和U2OS细胞迁移和侵袭的影响
3．4．4体内裸鼠成瘤实验检测敲低hsa_circ_0000530对MG63细胞皮下成瘤能力的影响
3．5．1 生物信息学预测hsa_circ_0000530、miR-198和CDK6之间的匹配结合位点
3．5．2构建双报告载体
3．5．3 双荧光素酶报告基因实验验证hsa_circ_0000530／miR-198／CDK6有相互匹配结合位点，三者之间可能存在调节轴关系
3．6转染miR-198 mimics对骨肉瘤细胞中miR-198和CDK6表达的影响
3．7．2过表达miR-198对MG63和U2OS细胞周期进程的影响
3．7．3过表达miR-198对MG63和U2OS细胞迁移和侵袭的影响
3．8．2 共转染hsa_circ_0000530 siRNA和miR-198 inhibitor对MG63、U2OS细胞增殖、细胞周期、迁移和侵袭的影响
4讨论
5结论
参考文献
综述
个人简历
致谢
郑州大学;
