NIX在高血压血管重塑中的生物学作用

摘要

目的：探讨 NIX在高血压诱导血管重塑进程中的表达变化、细胞分布及在血管平滑肌细胞中的作用，以发现高血压诱导血管重塑过程中新的调控分子，为有效控制、逆转血管重塑发生提供新的依据。　　方法：1、高血压诱导血管重塑进程中的NIX表达与细胞分布。1）采用腹主动脉缩窄术建立大鼠血管重塑模型，分为假手术组和手术组，每组8只，分别饲养8周。采用颈总动脉插管检测平均动脉压，采用HE染色检测血管组织的病理改变，采用Masson检测血管纤维化，采用蛋白免疫印迹法检测胶原和纤维连接蛋白表达水平，从而验证模型是否建立成功。采用蛋白免疫印迹法检测 NIX的表达，免疫组化对 NIX的表达进行定位，从而确定 NIX在高血压血管重塑大鼠模型中的变化和细胞分布。2）采用不同浓度的去甲肾上腺素（Norepinephrin，NE）诱导建立血管平滑肌细胞纤维化模型，分为0 mol/L、10-6 mol/L、10-5 mol/L、10-4 mol/L组，给予相应浓度的NE干预原代大鼠血管平滑肌细胞24小时。通过MTT、流式细胞术检测血管细胞增殖情况，蛋白免疫印迹达检测胶原蛋白和纤维链接蛋白表达水平，从而确定模型建立是否成功。采用蛋白免疫印迹法检测 NIX的表达，从而确定NIX在血管平滑肌细胞纤维化过程中的变化。2、NIX在NE诱导血管平滑肌细胞中的生物学作用。1）应用高表达 pcDNA3-NIX质粒转染大鼠血管平滑肌细胞，分为 Control（C）组，pcDNA3组、pcDNA3-NIX组、NE组、NE+pcDNA3组、NE+pcDNA3-NIX组，转染24小时后，加入10-5mol/LNE干预24小时。采用蛋白免疫印迹法检测 NIX的转染效果。采用 MTT、流式细胞术检测血管平滑肌细胞的增殖情况，蛋白免疫印迹检测胶原蛋白和纤维链接蛋白的表达，从而确定 NIX高表达对 NE诱导的血管平滑肌细胞纤维化的影响。2）siRNA-NIX转染大鼠血管平滑肌细胞，分为 C组、Negative control（NC）组、siRNA组、NE组、NE+NC组、NE+siRNA组，转染24小时后，10-5mol/L NE干预24小时。采用蛋白免疫印迹法检测 NIX的转染效果。采用 MTT、流式细胞术检测细胞增殖情况，蛋白免疫印迹法检测胶原蛋白和纤维连接蛋白的表达，从而确定抑制 NIX的表达对 NE诱导的血管平滑肌细胞纤维化的影响。　　结果：1、手术组大鼠的平均动脉压明显高于假手术组（P＜0.05）；HE染色结合图像分析仪结果显示，手术组大鼠的中膜厚度、中膜面积、中膜厚度/血管内径高于假手术组(P＜0.05)。Masson染色的结果显示，手术之后，大鼠血管组织中胶原蛋白的蓄积增多。蛋白免疫印迹显示血管组织中胶原蛋白和纤维链接蛋白的的表达显著升高。表明高血压血管重塑大鼠模型构建成功。同时发现手术组大鼠血管组织中NIX的表达明显高于假手术组。免疫组化的结果表明 NIX的表达主要定位在血管平滑肌细胞。2、MTT、流式细胞术结果显示，随着NE浓度的升高，大鼠血管平滑肌细胞增殖加剧（P＜0.05），蛋白免疫印迹的结果表明随着 NE浓度的增加，胶原蛋白和纤维连接蛋白的表达明显增加，表明NE诱导血管平滑肌细胞纤维化模型建立成功。同时，蛋白免疫印迹结果发现随着 NE浓度升高，NIX的表达明显增加。3、蛋白免疫印迹结果显示 NIX高表达质粒成功转入。MTT和流式细胞术的结果显示当 NIX高表达时，血管平滑肌细胞增殖加剧，同时 NE诱导血管平滑肌细胞的增殖也得到了促进（P＜0.05），蛋白免疫印迹结果显示当 NIX高表达时，胶原蛋白和纤维连接蛋白的表达水平明显升高，且促进了NE诱导下的胶原蛋白和纤维连接蛋白的表达。4、蛋白免疫印迹结果显示 siRNA-NIX成功转入。MTT和流式细胞术的结果显示当 NIX表达受到抑制是时，血管平滑肌细胞增殖受到抑制，同时缓解了NE诱导血管平滑肌细胞的增殖（P＜0.05），蛋白免疫印迹结果显示当NIX的表达受到抑制时，胶原蛋白和纤维连接蛋白的表达水平明显下降，且NE诱导下的胶原蛋白和纤维连接蛋白的表达也明显减少。　　结论：高血压血管重塑过程中，NIX的表达增加与血管纤维化的发生密切相关。此外，NIX在血管重塑过程中血管平滑肌细胞纤维化中起着调控作用。

目录

封面

声明

中文摘要

英文摘要

目录

英文缩率表

引言

第1章 高血压诱导血管重塑进程中的NIX表达与细胞分布

1.1实验材料与方法

1.2结果

1.3讨论

1.4小结

参考文献

第2章 NIX在血管重塑中血管平滑肌细胞纤维化过程中的生物学作用

2.1实验材料与方法

2.2 结果

2.3 讨论

2.4 小结

参考文献

第3章 综 述:高血压血管重塑的研究进展

3.1 血流动力学变化

3.2 血管活性物质

3.3内皮损伤

3.4 血管平滑肌细胞增生

3.5 细胞外基质蛋白的沉积

3.4 展望

参考文献

结论

致谢

导师简介

作者简介

学位论文数据集