多发性骨髓瘤中白细胞特异性蛋白LSP1调控NF-κB信号通路机制研究

摘要

LSP1蛋白表达于人和鼠的白细胞，内皮细胞等细胞中，作为白细胞的特异性表达的蛋白标记。LSP1也广泛异常表达于白血病和淋巴系肿瘤等疾病中，特别是在B细胞来源的肿瘤和霍奇金淋巴瘤的细胞中普遍呈现高表达。乳腺癌突变敏感位点高通量筛选发现，Lspl的单核苷酸突变rs3817198被认为是乳腺癌的标志之一。尽管上述发现提示了LSP1与肿瘤关系密切，但其作用和机制几乎完全不清楚。
　　 LSP1蛋白序列包括F-actin结合位点和Ca2+结合位点，并证实可与细胞骨架微丝蛋白相互结合的蛋白。LSP1参与调节中性粒细胞，巨噬细胞的迁移和趋化，调节血管内皮细胞的细胞形态和通透性，在炎症反应中起到至关重要的作用。并且LSP1参与了B淋巴细胞的凋亡和Dendriticcell对病原的识别和传递，在免疫系统中也起到一定的作用。
　　 多发性骨髓瘤是B细胞来源的血液肿瘤。前期研究提示，LSP1可能通过对NF-κB信号通路的调节，参与诱导了对Bortezomib的抗药性。本研究中进一步发现和证实，LSP1可与NF-κB信号通路中主要成份IKKα/β相互作用，抑制IKKα/β聚集到细胞膜，从而抑制了NF-κB信号通路的活化。对NF-κB信号通路的分析发现，LSP1促进了NF-κBp52蛋白入核，但对NF-κBp65/p50影响不显著，提示LSP1可能特异性的参与多发性骨髓瘤中NF-κB非传统信号通路的活化。
　　 本研究发现LSP1与IKKα/β相互作用并抑制其聚集到细胞膜上，从而抑制NF-κB信号通路活化及其调控基因的转录，揭示了LSP1参与NF-κB信号通路调解的作用和可能机制。

目录

声明

摘要

第1章 绪论

1．1 LSP1

1．1．1 LSP1概述

1．1．2 LSP1与炎症中的细胞迁移

1．1．3 LSP1与免疫细胞信号传导

1．1．4 LSP1与T细胞发育

1．1．5 LSP1与乳腺癌

1．1．6 LSP1与其他疾病

1．2 NF-κB概述

1．2．1 NF-κB信号通路经典途径

1．2．2 NF-κB信号通路非经典途径

1．2．3 NF-κB信号通路与actin

1．2．4 I κ B kinase IKK α and IKK β

1．3 多发性骨髓瘤

1．3．1 多发性骨髓瘤概述

1．3．2 Bortezomib

1．4 课题研究意义

1．5 课题研究思路

第2章 实验材料和方法

2．1 实验材料

2．1．1 细胞培养

2．1．2 质粒

2．1．3 试剂

2．1．4 抗体

2．1．5 引物

2．1．6 仪器设备

2．2 常用试剂配制方法

2．2．1 培养基

2．2．2 蛋白裂解buffer(RIPA)

2．2．3 Western blotting buffers

2．2．4 核蛋白抽提buffer

2．2．5 Co-IP buffer

2．2．6 琼脂糖电泳buffer(TAE buffer)

2．3 实验方法

2．3．1 细胞中全蛋白的提取

2．3．2 Western blotting

2．3．3 细胞内信号通路检测

2．3．4 细胞中总RNA的提取和RT-PCR

2．3．5 免疫共沉淀(Co-IP)

2．3．6 核蛋白的抽提

2．3．7 EMSA

2．3．8 亚细胞蛋白的抽提

2．3．9 AnnexinV/PI双染的细胞凋亡检测

2．3．10 荧光融合质粒的构建

2．3．11 质粒转染和免疫荧光

第3章 实验结果

3．1 LSP1抑制Bortezomib诱导的多发性骨髓瘤的凋亡

3．2 LSP1影响NF-κB信号通路的活化

3．3 LSP1与IKKα/β蛋白相互作用

3．4 LSP1抑制IKKα/β向膜上聚集

3．5 LSP1与IKKα/β共定位在细胞膜

第4章 结果分析与讨论

4．1 研究结果分析

4．2 研究切入点

4．3 创新点

4．4 不足与期望

参考文献

致谢