艾灸膻中、中脘、气海组穴对荷瘤小鼠免疫功能调节作用的实验研究

摘要

目的：研究艾灸对S180荷瘤小鼠的抑瘤作用以及艾灸对S180荷瘤小鼠免疫功能的影响。　　方法：实验昆明种雄性小鼠50只，随机选取10作为正常组（正常对照组），其余建立S180荷瘤模型后，随机分为荷瘤组（模型对照组)、化疗组（环磷酰胺腹腔注射)、假灸组（卫生纸做灸条施灸）及艾灸组（手工细艾条艾灸），每组10只。模型成功建立后予化疗、假灸及艾灸治疗，共14天。治疗结束后，采集新鲜外周血，用于流式细胞仪检测，检测小鼠的T细胞、活化的T细胞、B细胞CD19、成熟的B细胞、活化的B细胞、NK细胞、NKT细胞、Treg以及血清中的细胞因子；处死小鼠，分离瘤体、胸腺及脾脏计算抑瘤率、胸腺指数及脾脏指数，并HE染色观察病理形态。　　结果：　　1.抑制肿瘤生长：化疗组瘤重与荷瘤比较最小（P<0.05)，抑瘤率为35.17％;艾灸组瘤重次之(P>0.05)，抑瘤率为13.69%;假灸组瘤重最大(P>0.05)，抑瘤率为9.28%。　　2.胸腺指数及脾脏指数：各组间比较未见统计学差异。　　3. T细胞：荷瘤组CD3、CD4+、CD8+的含量分别为48.32%、39.99%、4.61%，较正常组的71.15%、51.18%、21.32%明显下降（P<0.01)，CD4+/CD8+显著升高（P<0.01);化疗组CD3+、CD4+、CD8+的含量分别为40.78%、33.68%、6.26%，相对荷瘤组明显下降(P<0.01)，CD4+/CD8+亦明显下降(P<0.01);假灸组CD3+、CD4+、CD8+的含量分别为52.62%、44.33%、8.22%，相对于荷瘤组的略有升高（P<0.05，P<0.05， P<0.01)， CD4+/CD8+相对下降(P<0.01);艾灸组 CD3+、CD4+、CD8+的含量分别为56.64%、47.62%、10.86%，相对于荷瘤组明显升高(P<0.05，P<0.01，P<0.01)，CD4+CD8+明显下降(P<0.01)。荷瘤组CD3+CD69+含量约为5.43%，较正常组的8.68%显著下降（P<0.01);化疗组CD3+CD69+含量约为2.56%，较荷瘤组显著下降（P<0.01);假灸组CD3+CD69+含量约为4.73%，与荷瘤组比较无统计学差异（P>0.05);艾灸组CD3+CD69+含量约为7.40%，较荷瘤组明显升高（P<0.05)。　　4.调节性T细胞：荷瘤组CD4+CD25+FOXP3+含量约为1.41%，较正常组的0.49%显著升高(P<0.01);化疗组、假灸组、艾灸组的CD4+CD25+FOXP3+含量分别为0.89%、0.82%、0.66%，较荷瘤组均明显下降（P<0.01)。　　5. B细胞：荷瘤组CD3-CD19+的含量约为26.15%，较正常组的22.65%略有升高，但无统计学差异(P>0.05);化疗组CD3-CD19+的含量约为6.92%，较荷瘤组显著下降(P<0.01)假灸组CD3-CD19+的含量约为24.62，与荷瘤组比较无统计学差异(P>0.05);艾灸组CD3- CD19+的含量约为31.77%，较荷瘤组明显升高（P<0.05)。荷瘤组CD19+CD69+、CD19+CD25+的含量约为6.29%和3.33%，较正常组的9.69%和5.01%显著下降(P<0.01);化疗组CD19+CD69+、CD19+CD25+的含量约为3.29%和0.69%，较荷瘤组显著下降(P<0.01);假灸组 CD19+CD69+、CD19+CD25+的含量分别约为5.24%，0.82%，较荷瘤组下降（P>0.05，P<0.01);艾灸组CD19+CD69+的含量约为7.10%，较荷瘤组明显升高(P<0.01)，CD19+CD25+的含量约为1.33%，较荷瘤组明显下降(P<0.01)。荷瘤组CD23+、CD45R(B220)+的含量分别为18.21%和13.85%，较正常组的13.71%和13.85%显著升高(P<0.01);化疗组CD23+、CD45R(B220)+的含量分别为6.59%、8.68%，较荷瘤组显著下降（P<0.01);假灸组CD23+、CD45R(B220)+的含量分别为18.86%和22.60%，与荷瘤组比较无统计学差异(P>0.05);艾灸组CD23+、CD45R(B220)+的含量约为23.21%和28.62%，较荷瘤组明显升高（P<0.01)。　　6. NK细胞:荷瘤组CD3-NK1.1+含量约为5.49%，较正常组的4.85%略有升高(P>0.05);化疗组CD3-NK1.1+含量约为2.16%，较荷瘤组显著下降（P<0.01);假灸组、艾灸组CD3- NK1.1+含量分别约为3.48%、4.54%，与荷瘤组比较无统计学差异（P>0.05)。　　7. NKT细胞:荷瘤组CD3+NKT+的含量约为2.91%，较正常组的6.47%显著下降(P<0.01);化疗组、假灸组、艾灸组CD3+NKT+的含量分别为3.46%、3.34%、3.99%，与荷瘤组比较均无统计学差异(P>0.05)。　　8.细胞因子:荷瘤组IL-2含量约为2.42pg/ml，较正常组的4.25 pg/ml显著降低(P<0.01);化疗组和假灸组IL-2含量分别为3.03 pg/ml、3.21pg/ml，较荷瘤组略有升高（P>0.05);艾灸组IL-2含量为3.70 pg/ml，较荷瘤组明显升高（P<0.01)。荷瘤组TNF含量约为18.84pg/ml，较正常组的19.57pg/ml略有下降(P>0.05);化疗组TNF含量约为13.77pg/ml，较荷瘤组明显下降(P<0.05);假灸组和艾灸组TNF含量分别为15.13pg/ml和15.54pg/ml，与荷瘤组比较无统计学差异（P>0.05)。荷瘤组IFN-y的含量为2.30pg/ml，较正常组的2.73pg/ml略有下降（P>0.05);化疗组、假灸组、艾灸组IFN-y含量分别为3.67pg/ml，2.77pg/ml和4.61pg/ml，较荷瘤组明显升高（P<0.05，P<0.01)。荷瘤组IL-4的含量约为3.16pg/ml，较正常组略有下降（P<0.01);化疗组、假灸组、艾灸组I L-4含量分别为2.19pg/ml、3.31pg/ml、4.02pg/ml，较荷瘤组无统计学差异（P>0.05)。荷瘤组IL-6的含量约为6.44pg/ml，较正常组的15.38pg/ml显著下降（P<0.01);化疗组、假灸组IL-6含量分别为9.08pg/ml和7.70pg/ml，较荷瘤组无统计学差异（P>0.05);艾灸组IL-6含量约为12.93pg/ml，较荷瘤组显著升高（P<0.01)。荷瘤组IL-10的含量约为10.24pg/ml，较正常组的13.67pg/ml明显下降(P<0.05);化疗组、假灸组IL-10含量分别为11.30pg/ml和12.58pg/ml，较荷瘤组无统计学差异（P>0.05);艾灸组IL-10含量约为13.50pg/ml，较荷瘤组明显升高(P<0.05)荷瘤组IL-17A的含量约为8.04pg/ml较正常组的5.26pg/ml明显升高（P<0.01);化疗组、假灸组IL-17A含量分别约为8.85pg/ml和7.32pg/ml，较荷瘤组无统计学差异（P>0.05);艾灸组IL-17A含量约为5.85pg/ml，较荷瘤组明显下降(P<0.05)　　结论：1.荷瘤小鼠模型免疫功能出现抑制现象。2.移植瘤短期内其胸腺指数未见明显变化，但胸腺功能已发生了严重的损伤，且艾灸对其具有一定的修复作用。3.环磷酰胺对S180肉瘤具有明显的抑瘤作用，同时对机体免疫系统具有明显的损伤4.艾灸对荷瘤小鼠的细胞免疫、体液免疫具有正向调节作用，同时艾灸可以减轻移植瘤引起的炎症反应。5.艾灸明显好于假灸的普通热刺激，说明艾灸改善和修复免疫功能的作用更好。假灸的温热效应也具有一定的免疫改善作用。6.艾灸可以促进T细胞生成与活化，促进成熟B细胞的生成与活化。

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英文缩略词表

前言

技术路线图

实验部分

1 实验材料

1. 1实验动物

1. 2实验材料

1.3实验仪器设备

1. 4实验试剂

1.5实验用品

2. 实验方法

2. 1动物分组

2. 2荷瘤模型的建立.

2. 3治疗组操作

2. 4胸腺指数及脾指数测定

2. 5肿瘤体积生长曲线及抑瘤率的测定

2 .6肉瘤、胸腺、脾脏组织H E染色

2.7 T淋巴细胞亚群分析

2 .8活化T细胞亚群分析

2. 9 Treg细胞亚群分析

2. 10 B细胞亚群分析

2.11 NK及 NKT细胞亚群分析

2.12流式液相多重蛋白定量技术（Cytometric Bead Array CBA)测定血清中细胞因子

2 .1 3统计学及分析方法

3. 结果

3. 1—般参数

3.2抑瘤率及肿瘤生长曲线

3. 3胸腺指数及脾脏指数

3 .4艾灸对T细胞及其亚群的影响

3. 5艾灸对活化T细胞的影响

3. 6艾灸对调节性T细胞的影响

3 .7艾灸对B细胞发育的影响

3 .8艾灸对N K及NKT细胞的影响

3. 9艾灸对细胞因子的影响

3 .1 0艾灸对胸腺、脾脏及肉瘤组织病理的影响

讨论

1理论依据及选穴原则

1 .1肿瘤的“因寒成积” 病因及艾灸的“寒而温之”治则

1 .2肿瘤的三焦辨治论说

2 三种治疗方法组间比较

2. 1艾灸的作用明显优于普通温热刺激

2. 2化疗对对荷瘤小鼠的有明显的免疫抑制作用

3 艾灸对细胞免疫及体液免疫应答的影响

3. 1艾灸对T细胞发育的影响

3. 2艾灸对Treg细胞的影响

3 .3艾灸对B细胞发育的影响

3. 4艾灸对NK和NKT细胞的影响

3. 5艾灸对细胞因子的影响

结论

创新点

参考文献

综述:艾灸对肿瘤相关免疫机制影响的研究现状

致谢

个人简历