散血草乙醇提取物对小鼠血管内皮瘤细胞生长影响的研究

摘要

目的:中药用于肿瘤的辅助治疗是目前一个新的热点研究领域。散血草是一种常见的祖国传统中草药，应用历史悠久。本课题拟通过研究散血草乙醇提取物对体外培养的血管内皮瘤细胞（EOMA细胞）生长和凋亡的影响，探讨其对于血管瘤内皮细胞生长的可能影响，为散血草治疗血管瘤奠定细胞学基础及理论依据，为治疗血管瘤提供新的方法。　　方法:利用小鼠血管内皮瘤细胞株进行体外细胞培养，将实验细胞分为阴性对照组:B1（单纯PBS溶液处理）和不同浓度散血草乙醇提取物干预组:B2（添加药物为100μ g/mL的散血草乙醇提取物）、B3（添加药物为1mg/mL的散血草乙醇提取物）三组。利用乙醇回流法获得的散血草乙醇提取物，作为试验药物。用散血草乙醇提取物干预培养的细胞。观察比较三组体外培养的EOMA细胞在药物作用下，干预24h、48h、72h后的细胞生长情况。HE染色检测细胞形态学改变。Ki67标记流式检测三组细胞增殖情况;使用流式细胞术（AnnexinⅤ/PI染色法）测定不同浓度药物作用后三组细胞的凋亡情况; RT-PCR（半定量）检测其VEGF mRNA表达情况。免疫荧光染色检测各组细胞VEGFR蛋白的表达。所得数据结果用均数±标准差((x)±s)表示，两样本均数比较使用独立样本t检验;多个样本两两比较先使用方差分析(ANOVA)后再使用多样本两两比较中的SNK法进行比较，实验数据使用SPSS17.0软件分析处理，设定P＜0.05表示差异有统计学意义。　　结果:在干预后24h、48h、72h分别观察各组EOMA细胞生长情况，见对照组血管内皮瘤细胞生长旺盛，在72h就铺满2/3以上的培养瓶底部，呈贴壁生长，细胞外形呈梭形，局部有克隆聚落形成。而散血草提取物干预组细胞生长相对缓慢、稀疏，聚落生长不明显，尤以1mg/mL组为甚。在干预后72h，正常对照组Ki67表达结果为160.13±4.57，100μg/mL加药组表达结果为107.81±11.65，1mg/mL加药组表达结果为37.41±1.16。在干预后第24、48、72小时时间点上，100μ g/ml药物组和1mg/mL药物组细胞Ki67平均荧光强度较对照组低，差异具有统计学意义（P＜0.05);1mg/mL药物组细胞平均荧光强度值较100μ g/ml药物组低，差异具有统计学意义（P＜0.05)。在干预后72h，正常对照组细胞凋亡表达结果为2.15±0.22，100μg/mL加药组表达结果为54.04±4.87，1mg/mL加药组表达结果为77.95±2.93。在干预后第24、48、72小时时间点上，100μ g/ml药物组、1mg/mL药物组细胞凋亡率均较对照组高，差异具有统计学意义（P＜0.05);1mg/mL药物组细胞凋亡率较100μ g/ml药物组高，差异具有统计学意义（P＜0.05)。在干预后72h，100μ g/ml药物组、1mg/mL药物组VEGFmRNA的表达较对照组低，差异具有统计学意义，(P＜0.05);1mg/mL药物组VEGFmRNA的表达又较100μg/ml药物组低，差异具有统计学意义（P＜0.05)。在干预后72h各组细胞VEGFR免疫荧光检测均为阳性表达，各组间单个细胞上的VEGFR表达无明显差异，但由于药物干预组细胞生长缓慢、凋亡增加，故同样大小视野内VEGFR表达对照组最多，1mg/ml组最低。　　结论:散血草乙醇提取物在体外有抑制EOMA细胞生长、促进其凋亡的作用。其对EOMA细胞的作用机制可能与其下调EOMA细胞VEGF的表达水平有关。

目录

摘要

前言

材料和方法

1．实验药物、仪器及试剂

2．EOMA细胞培养、实验分组及药物处理

3．检测指标

4．统计学分析

结果

1、各组EOMA细胞生长情况

2、细胞增殖核抗原Ki67表达流式检测细胞检测结果

3、细胞凋亡检测结果(流式细胞术，Annexin V／PI染色法)

4、VEGF mRNA表达结果

5、VEGFR免疫荧光(IF)检测结果

讨论

结论

参考文献

中英文对照

致谢

综述

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