小鼠卵泡发育过程中miRNA-224表达调控的分子机制研究

摘要

MicroRNAs(miRNAs)已经发现在卵巢卵泡发育过程中起着关键作用。但是，关于哺乳动物卵巢中miRNA基因自身的表达调控还知之甚少。本实验室之前报道miR-224通过靶向Smad4参与转化生长因子-β1(TGF-β1)介导的卵泡颗粒细胞生长和雌二醇生成。本研究中，miR-224在颗粒细胞中表达的转录调控被进一步研究。我们的结果显示抑癌基因p53和NF-κB家族p65抑制TGF-β1诱导的pri-miR-224在颗粒细胞中的表达。核质分离和染色质免疫共沉淀实验证实TGF-β1能够诱导p53和p65由胞质向胞核转移和促进p53和p65结合在GABAA受体ε亚基(GABRE)（miR-224宿主基因）近端启动子区域上。p53和p65协同转录抑制GABRE启动子活性。进一步实验发现颗粒细胞中p53和p65可以通过抑制下游miR-224来上调SMAD4表达，这至少部分影响了miR-224和SMAD4对于颗粒细胞增殖和雌二醇分泌的效应。
　　另外，本实验室之前的研究显示miR-224靶向于在排卵过程中对与卵丘扩展非常关键的基因正五聚蛋白3(Ptx3)，TGF-β1可以促进小鼠卵巢壁颗粒细胞和卵丘卵母细胞复合物(COCs)中PTX3表达。本研究中，通过构建腺病毒介导的miR-224过表达载体(Ad-miR-224)，在体内和体外进一步检测miR-224对于排卵盼影响。体外研究证实，miR-224通过降低表皮生长因子(EGF)诱导COCs的PTX3分泌来抑制卵丘扩展。体内研究也显示，卵巢囊内注射Ad-miR-224可以降低PTX3表达和抑制排卵，这些导致了胚胎着床和子代出生的数量减少。
　　综上所述，我们的结果为转录因子通过相互作用调控miRNA表达来参与颗粒细胞增殖和功能提供了新的数据。而且，miR-224可以通过靶向Ptx3影响排卵和接下来的胚胎发育，这提示miRNAs对于治疗排卵障碍相关的不孕或者设计新的避孕药具有潜在的价值。