声明
摘要
中英文缩略词表
引言
1实验材料
1．1细胞系
1．2主要试剂
1．3主要仪器
1．4主要试剂的配制
1．4．1细胞培养试剂
1．4．2软琼脂克隆形成实验试剂
1．4．3蛋白质免疫印迹试剂
1．4．4质粒转化试剂
1．4．5免疫荧光实验试剂
1．4．6碱性彗星实验试剂
2实验方法
2．1细胞的培养
2．1．1复苏细胞
2．1．2细胞传代
2．1．3细胞冻存
2．2蛋白质免疫印迹
2．2．1细胞总蛋白的提取
2．2．2细胞蛋白浓度的测定
2．2．3western blotting
2．3 DNA pol β野生型、突变型及CHD1L敲低的人食管癌细胞稳株的构建
2．3．1质粒的构建
2．3．2慢病毒包装和病毒液的产生
2．3．3病毒液感染人食管癌细胞并鉴定转染效果
2．4细胞增殖实验
2．5细胞毒性实验
2．6软琼脂克隆形成实验
2．7细胞免疫荧光实验
2．8蛋白质组学实验
2．9细胞周期实验
2．10碱性彗星实验
2．11统计学方法
3实验结果
3．2．2含野生型DNA pol β真核表达重组质粒plvx-IRES-NEO-pol β的构建、改造及细胞稳株的建立
3．2．3 Kyse150和EC109细胞中DNA pol β过表达野生型及突变型细胞稳株的建立及生长特性检测
3．2．4 DNA pol β突变影响人食管癌细胞对化疗药物5-氟尿嘧啶和顺铂的敏感性检测
3．2．5软琼脂克隆形成实验分析DNA pol β突变对人食管癌细胞克隆形成的影响
3．2．6 DNA pol β突变影响人食管癌细胞对DNA损伤剂甲基磺酸甲酯的敏感性检测
3．2．7碱性彗星实验分析DNA pol β突变对人食管癌细胞损伤修复的影响
3．3 利用蛋白质组学分析初步寻找参与DNA pol β突变对人食管癌细胞化疗敏感性影响的关键分子
3．4研究CHD1L在DNA pol β突变体R183G影响人食管癌化疗敏感性中的作用
3．4．2管癌细敲低CHD1L影响DNA pol β过表达野生型及突变型R183G人食胞对5-氟尿嘧啶、顺铂和甲基磺酸甲酯的敏感性检测
3．4．3软琼脂克隆形成实验分析敲低CHD1L对DNA pol β突变型R183G人食管癌细胞克隆形成的影响
3．4．4流式细胞术分析敲低CHD1L对DNA pol β突变型R183G人食管癌细胞周期的影响
3．4．5细胞免疫荧光及碱性彗星实验分析敲低CHD1L对DNA pol β突变型R183G人食管癌细胞损伤修复的影响
4讨论
5结论
参考文献
综述
个人简历
致谢
郑州大学;
