PI3K/AKT/eNOS信号通路在大鼠慢传输型便秘中的作用

摘要

目的:慢传输型便秘（Slow transit constipation，STC）是一种功能性便秘，其最显著的特征是胃肠动力学障碍，肠道转运功能失调，患病者最主要的临床表现为大便次数明显减少，常无便意感，大便干燥呈羊粪状伴随着排出费力、排出困难等症状，严重影响患者的生活质量。本研究通过分子生物学手段探讨其发生的具体信号机制，并为开发合理的临床用药提供理论依据。　　方法:选取84只健康SD大鼠，220-240g，雌雄各半，饲养于河北联合大学动物实验中心屏障实验室。随机分为60d对照组、90d对照组、60d模型组、90d模型组、90d+LY294002模型组及90d+L-NAME模型组，每组14只。通过统计学方法处理，分组后各组间在体重、性别无差异。苯乙哌啶是临床上常用的止泻剂，实验组大鼠予苯乙哌啶8mg/kg每日灌胃制造大鼠STC模型，且用同等剂量的生理盐水灌胃作为对照组，每5d记录1次大鼠大便粒数、大便干重及大鼠重量，在大鼠饲养至60d及90d后，停药1周，活性炭灌胃法测定胃肠道传输时间，并用生物机能实验方法测定大鼠结肠肌电活动；ELISA法检测组织中NO和内皮型NO合成酶（eNOS）含量；运用Western blot方法检测解剖后大鼠的胃窦、小肠、结肠组织中P-Akt的表达情况；并观察LY294002（PI3K阻断剂）和L-NAME（NO合成酶NOS抑制剂）对远端结肠组织中P-Akt表达的影响。　　结果:　　1.各模型组与对照组比较，日均粪便粒数明显减少，平均每粒粪便质量明显增加、首粒黑便排出时间明显延长（P<0.05）。　　2.模型组大鼠结肠肌电波动即慢波电位呈现出现双向型改变，表现为不规则的近似正弦波样曲线，慢波频率明显减慢，振幅增加。　　3.模型组大鼠从胃窦-小肠-远端结肠组织，NO和内皮型NOS（eNOS）含量呈逐渐增高的趋势，且以远端结肠组织中含量最多（P<0.05）。　　4.在胃窦组织，60d、90d模型组与60d、90d对照组相比，大鼠P-Akt的表达均无明显差异(P>0.05)；在小肠组织，60d模型组与60d对照组相比，P-Akt的表达无显著性差异(P>0.05)，而90d模型组与90d对照组相比，表达有明显差异(P<0.05)；在远端结肠组织，60d、90d模型组与相应的60d、90d对照组相比，P-Akt的表达均有显著性差异(P<0.05)，并且在运用 PI3K阻断剂LY294002和NO合成酶(NOS)抑制剂L-NAME后，发现与90d模型组相比，90d+LY294002模型组P-Akt的表达明显减少，而90d+L-NAME模型组的P-Akt的表达明显升高(P<0.05)。　　结论:PI3K/AKT/eNOS信号通路很可能参与了大鼠STC的发病机制，并且这一作用主要是通过影响远端结肠组织的功能来完成。

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引言

第1章 实验研究

1.1 材料与方法

1.1.1 实验对象

1.1.2 实验试剂

1.1.3 动物分组及模型建立

1.1.4 各项指标的采集

1.1.5 统计学分析

1.2 实验结果

1.2.1 两组大鼠日均粪便粒数、粪便质量及首粒黑便排出时间的比较

1.2.2 大鼠结肠肌电图的变化

1.2.3 两组大鼠胃窦组织P-Akt表达情况的比较

1.2.4 两组大鼠小肠组织P-Akt表达情况的比较

1.2.5 两组大鼠远端结肠组织P-Akt表达情况的比较

1.2.6 ELISA法检测组织中NO和内皮型NOS（eNOS）含量

1.2.7运用抑制剂后，观察大鼠远端结肠组织P-Akt的表达情况

1.3 讨论

1.4 小结

参考文献

第2章 综述: 慢传输型便秘研究新进展

2.1 与慢传输型便秘发病相关的信号因子

2.1.1 c-kit基因在慢传输型便秘大鼠胃肠道的表达

2.1.2 P2X2受体在慢传输型便秘大鼠模型结肠中的表达及意义

2.1.3 便秘大鼠胃肠道细胞凋亡及 bcl-2、Bax 变化研究

2.1.4 雌激素受体β在慢传输性便秘发病中的作用及机制探讨

2.1.5 脑源性神经营养因子能够增加慢传输型便秘患者的肠道蠕动

2.2 慢传输型便秘的治疗进展

2.2.1 一般疗法

2.2.2 中医学在治疗慢传输型便秘中的作用

2.2.3 神经刺激在慢传输型便秘中的作用

2.2.4西医在治疗慢传输型便秘中的作用

参考文献

结论

致谢

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