呼吸道感染细菌联合疫苗制备及免疫效果评价

摘要

目的：研制我国小儿常见呼吸道感染细菌联合疫苗，分别对其进行体外实验与动物体内实验研究。通过检测免疫细胞增殖、细胞因子生成、细胞表型变化、小鼠细胞免疫功能、体液免疫功能、吞噬细胞功能和脏器指数等一系列特异性免疫功能及非特异性免疫功能的免疫学指标，探讨此联合疫苗对机体免疫功能的影响，进一步确定其影响机体免疫系统的机制，为研制我国呼吸道感染细菌联合疫苗提供理论依据。　　方法：1、制备联合疫苗分离培养我国小儿呼吸道感染常见6种细菌（溶血性链球菌、流感嗜血杆菌 B型、肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌），用生理盐水洗细菌三次，然后超声波破碎细菌，用饱和硫酸铵沉淀细菌蛋白，再通过透析膜去除硫酸铵，分光光度计测定蛋白含量，作为抗原。将抗原混合后用生理盐水配置成一定浓度作为联合疫苗。2、体外实验1）用 CCK-8法检测联合疫苗对人淋巴细胞增殖活性的影响。2）酶联免疫吸附试验（ELISA）测细胞因子白细胞介素-2（IL-2)和干扰素-γ（IFN-γ）含量；3）流式细胞仪(FCM)检测细胞表型变化。3、体内实验取 SPF级小鼠40只，随机分成四组：正常对照组（NC），联合疫苗1组，联合疫苗2组，联合疫苗3组，每组10只。全部实验小鼠饲喂基础日粮，适应性喂养10天后，分别用浓度为0.1mg∕ml，0.2mg∕ml，0.4mg∕ml联合疫苗免疫1组，2组，3组小鼠，每天上午灌服0.2ml。NC组小鼠每天灌服0.2ml生理盐水。免疫10天。然后将小鼠处死，进行免疫学实验检测。1）测定联合疫苗组小鼠巨噬细胞吞噬功能。2）观察联合疫苗对小鼠细胞免疫功能（迟发型超敏反应，DTH）的影响。3）检测联合疫苗组小鼠血清中溶血素含量的变化。4）观察联合疫苗对小鼠胸腺指数和脾脏指数的影响。　　结果：1、人外周血淋巴细胞增殖活性检测结果显示：各浓度联合疫苗组OD值均高于对照组，均对外周血淋巴细胞起增殖作用（P＜0.05），最佳浓度为50μg/ml。2、细胞因子 IFN-γ、IL-2检测结果显示：各浓度联合疫苗组 IFN-γ、IL-2值均高于对照组（P＜0.05，P＜0.01）。最佳浓度为50μg/ml，高于此浓度时，细胞因子含量开始降低。3、流式细胞仪检测 CD3+细胞和CD19+细胞的结果显示：联合疫苗组CD3+细胞数与 CD19+细胞数均高于对照组（P＜0.01）。4、小鼠巨噬细胞吞噬功能检测结果显示：对照组巨噬细胞吞噬率和吞噬指数分别为22.5±1.95和0.32±0.20；联合疫苗组均显著高于正常对照组（P＜0.01）。5、小鼠迟发型超敏反应检测结果显示：联合疫苗组左右后足重量差分别为21.60±2.07mg、23.36±2.65mg、25.63±3.02mg，显著高于正常对照组的16.50±2.12mg（P＜0.01）。6、血清溶血素含量结果显示：对照组溶血素吸光度值为0.205±0.023，各浓度联合疫苗组溶血素吸光度值分别为0.219±0.018，0.236±0.022，0.258±0.015，均高于对照组（P＜0.01）。7各浓度联合疫苗组与对照组相比，脾脏指数和胸腺指数均显著增高（P＜0.01）。　　结论：1、制备的联合疫苗可提高机体免疫功能。2、联合疫苗不仅能提高体液免疫功能，对细胞免疫功能也具有明显影响。

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引言

第1章 实验研究

1.1 材料与方法

1.1.1 主要试剂

1.1.2 主要仪器设备

1.1.3 菌种来源

1.1.4血液标本来源

1.1.5 实验动物

1.1.6 联合疫苗的制备

1.1.7 体外实验

1.1.8 体内实验

1.1.9 统计学分析

1.2 结果

1.2.1体外实验研究结果

1.2.2体内实验研究结果

1.3 讨论

1.3.1 联合疫苗对人外周血淋巴细胞增殖的影响

1.3.2 联合疫苗对淋巴细胞亚群影响

1.3.3 联合疫苗对细胞因子IL-2、 IFN-γ生成的影响

1.3.4联合疫苗对巨噬细胞吞噬功能的影响

1.3.5联合疫苗对细胞免疫功能（迟发型超敏反应，DTH）的影响

1.3.6 联合疫苗对小鼠血清溶血素含量的影响

1.3.7 联合疫苗对小鼠脏器指数的影响

1.4 小结

参考文献

第2章 综 述:联合疫苗的研究现状

2.1 联合疫苗的发展简史

2.2 联合疫苗的概况

2.2.1 以DTP为主的联合疫苗

2.2.2 麻疹、风疹、腮腺炎联合疫苗（MMR）

2.2.3 甲肝、乙肝联合疫苗（hepatitis A-hepatitis B, HepA-HepB）

2.2.4 甲型肝炎-伤寒联合疫苗

2.2.5 肺炎球菌疫苗

2.2.6 脑膜炎球菌多价疫苗

2.2.7 轮状病毒疫苗

2.2.8 新型联合疫苗

2.2.9 其他联合疫苗

2.3 存在的问题

2.3.1 联合疫苗的稳定性

2.3.2 联合疫苗的有效性

2.3.3 联合疫苗的安全性

2.4 展望

参考文献

结论

致谢

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