缺血预适应对局灶性脑缺血再灌注大鼠低氧诱导因子-1α及存活素表达的影响

摘要

目的：观察缺血预适应对局灶性脑缺血再灌注大鼠缺血灶周围皮质区及缺血侧海马 CA1区低氧诱导因子-1α（HIF-1α）及存活素（Survivin）表达的影响，探讨缺血预适应的脑保护机制。　　方法：130只雄性SD大鼠，随机分为假手术组（SO组，n=10）、脑缺血组（MCAO组，n=60）、脑缺血预适应组（BIP组，n=60），后两组再分为缺血2h再灌注2h、6h、12h、24h、48h、72h6个观察时间点（每个时间点各10只，其中5只用于免疫组化染色，另外5只用于Western blot检测）。采用大脑中动脉两次线栓法制备大鼠脑缺血预适应模型。各组作如下处理：BIP组：大脑中动脉缺血10min为预适应条件，24h后行大脑中动脉缺血2h；MCAO组：以假手术代替预适应，余步骤同BIP组；SO组：以两次假手术代替预适应及再缺血。免疫组织化学染色及Western blot法检测缺血灶周围皮质区及缺血侧海马CA1区HIF-1α、Survivin的表达情况。　　结果：1、SO组皮质区 HIF-1α阳性细胞表达水平低（4.77±1.11），蛋白表达量低（0.45±0.03）。MCAO组缺血灶周围皮质区 HIF-1α阳性细胞、缺血侧皮质区HIF-1α蛋白量表达均于脑缺血再灌注2h升高，24h达各时间点最高水平，随后表达逐渐降低，72h时仍明显高于 SO组。BIP组缺血灶周围皮质区 HIF-1α阳性细胞及缺血侧皮质区HIF-1α蛋白量表达趋势与MCAO组一致，相同时间点HIF-1α阳性细胞数量及蛋白表达量均高于 MCAO组，差异有统计学意义（P<0.05）。MCAO组、BIP组HIF-1α阳性细胞数量及蛋白表达量均高于SO组，差异有统计学意义（P<0.05）。2、SO组海马 CA1区 HIF-1α阳性细胞的表达较低（4.80±1.30），蛋白表达量较低（0.35±0.03）。MCAO组缺血侧海马CA1区HIF-1α阳性细胞及蛋白量表达于脑缺血再灌注后2h升高，24h在各时间点表达水平最高，而后逐渐下降，72h时表达接近6h水平。BIP组缺血侧海马 CA1区 HIF-1α阳性细胞及蛋白量表达规律与 MCAO组一致，除再灌注2h、6h外，相同时间点BIP组 HIF-1α阳性细胞的数量高于 MCAO组，差异有统计学意义（P<0.05）；BIP组各时间点 HIF-1α蛋白表达量均高于 MCAO组，差异有统计学意义（P<0.05）。MCAO组、BIP组 HIF-1α阳性细胞数量及蛋白表达量均高于 SO组，差异有统计学意义（P<0.05）。3、SO组皮质区可见少量 Survivin阳性细胞表达（4.96±0.63），少量 Survivin蛋白表达（0.59±0.03）。MCAO组于脑缺血再灌注2h缺血灶周围皮质区 Survivin阳性细胞、缺血侧皮质区 Survivin蛋白量表达增加，48h达各时间点最高水平，72h时表达接近24h水平。BIP组缺血灶周围皮质区 Survivin阳性细胞、缺血侧皮质区 Survivin蛋白量的表达趋势与 MCAO组具备相同的时间规律性，除再灌注2h外，同一时间点BIP组Survivin阳性细胞表达数量高于 MCAO组，差异有统计学意义（P<0.05）；BIP组各时间点 Survivin蛋白表达量较 MCAO组高，两组比较差异有统计学意义（P<0.05）。MCAO组与 BIP组 Survivin阳性细胞的表达数量及蛋白表达量均高于 SO组，差异有统计学意义（P<0.05）。4、SO组海马CA1区Survivin阳性细胞表达量少（3.18±0.46），蛋白表达量少（0.39±0.03）。MCAO组于脑缺血再灌注2h缺血侧海马CA1区Survivin阳性细胞及蛋白量表达增加，24h在各时间点水平为最高，随后表达逐渐下降，72h时表达接近6h水平。BIP组缺血侧海马CA1区 Survivin阳性细胞及蛋白量的表达趋势与 MCAO组时间性一致，且各时间点 Survivin阳性细胞的表达数量及蛋白表达量均高于 MCAO组，差异有统计学意义（P<0.05）。以上两组 Survivin阳性细胞及蛋白的表达水平均高于SO组，差异有统计学意义（P<0.05）。　　结论：1、缺血预适应可以促进局灶性脑缺血再灌注大鼠缺血灶周围皮质区及缺血侧海马CA1区HIF-1α、Survivin的表达。2、缺血预适应可能通过HIF-1α、Survivin的表达上调参与脑缺血耐受的发生。

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引言

第1章 实验研究

1.1 材料与方法

1.1.1 动物

1.1.2 主要试剂

1.1.3 主要仪器

1.1.4 动物分组

1.1.5 建立模型

1.1.6 模型入选标准

1.1.7 免疫组织化学染色法检测HIF-1α、Survivin的表达

1.1.8 免疫印迹（Western blot）法检测HIF-1α、Survivin蛋白的表达

1.1.9 统计学处理

1.2 结果

1.2.1 免疫组化结果

1.2.2 Western Blot结果

1.3 讨论

1.3.1 缺血预适应与脑缺血耐受

1.3.2 局灶性脑缺血再灌注大鼠HIF-1α、Survivin的表达及缺血预适应对其影响

1.3.3 HIF-1α与Survivin的关系

1.4 结论

参考文献

第2章 综 述

2.1 低氧诱导因子-1α、存活素与脑缺血耐受

2.1.1 HIF-1α与脑缺血耐受

2.1.2 Survivin与脑缺血耐受

2.1.3 HIF-1α与Survivin的关系

参考文献

附录

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