脑缺血预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注后自噬及凋亡的影响

摘要

目的:　　研究脑缺血预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注后自噬及凋亡的影响。　　方法:　　采用线栓法建立大鼠右侧大脑中动脉缺血预处理和缺血再灌注模型，将实验动物随机分为3组：假手术组、缺血再灌注组及缺血预处理组，各组按照再灌注后2h、6h、12h、24h、3d、5d分为6个亚组，各亚组大鼠在规定时间点行神经功能障碍评分观察神经功能缺损情况，TTC染色观察脑梗死体积，HE染色观察脑组织病理形态，免疫组织化学染色观察自噬及凋亡相关蛋白Beclin-l、LC3-II、Bcl-2、Caspase-3表达变化，透射电子显微镜观察神经细胞中自噬及凋亡形态结构变化。结果1与假手术组大鼠相比，缺血再灌注组及缺血预处理组大鼠均可见不同程度神经功能缺损、缺血侧大脑半球梗死及梗死区神经细胞损伤。与缺血再灌注组大鼠相比，缺血预处理组大鼠神经功能障碍评分明显减低（P<0.05），缺血侧大脑半球梗死体积明显缩小（P<0.05），梗死区神经细胞损伤明显减轻。　　2.与假手术组大鼠相比，缺血再灌注组及缺血预处理组大鼠再灌注后各时间点Beclin-l和LC3-II表达不同程度增多。与缺血再灌注组大鼠相比，缺血预处理组大鼠再灌注后各时间点Beclin-l和LC3-II表达不同程度减少（P<0.05）。　　3.与假手术组大鼠相比，缺血再灌注组及缺血预处理组大鼠再灌注后各时间点Bcl-2和Caspase-3表达不同程度增多。与缺血再灌注组大鼠相比，缺血预处理组大鼠再灌注后各时间点Bcl-2表达不同程度增多（P<0.05），Caspase-3表达不同程度减少（P<0.05）。　　4.假手术组大鼠神经细胞未见自噬及凋亡形态结构。缺血再灌注后2h可见少量自噬溶酶体，凋亡仍不明显；缺血再灌注后6h自噬溶酶体数量增多，可见轻度细胞凋亡改变；缺血再灌注后12～24h自噬溶酶体数量增多，细胞凋亡改变程度增加，表现为核染色质块状边集，核形态不规则等，持续到3d；缺血再灌注后5d仍可见自噬及凋亡形态结构。缺血预处理组大鼠与缺血再灌注组大鼠相比，神经细胞自噬及凋亡发生程度减低。　　结论:　　1.脑缺血再灌注可损伤神经细胞，使细胞发生自噬及凋亡，表现为神经功能缺损，缺血侧大脑半球梗死及梗死区神经细胞损伤，自噬及凋亡相关蛋白Beclin-l、LC3-II、Bcl-2和Caspase-3表达显著增加，神经细胞自噬溶酶体数量增多，并出现明显的细胞凋亡改变。　　2.脑缺血预处理对神经细胞具有保护作用，使细胞自噬及凋亡发生程度减低，表现为减少神经功能缺损，缩小缺血侧大脑半球梗死体积及减轻梗死区神经细胞损伤，自噬及凋亡相关蛋白Beclin-l、LC3-II和Caspase-3表达明显减少，Bcl-2表达明显增多，神经细胞自噬溶酶体数量减少，而且细胞凋亡改变程度减低。

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引言

第1章 实验研究

1.1 材料与方法

1.1.1 实验动物

1.1.2 主要试剂

1.1.3 主要仪器

1.2 实验方法

1.2.1 实验分组

1.2.2 建立大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型

1.3 指标检测与方法

1.3.1 神经功能障碍评分

1.3.2 氯化三苯基四唑氮（Triphenyltetrazolium chloride，TTC）染色

1.3.3 脑组织石蜡切片制作

1.3.4 苏木素-伊红（Hematoxylin eosin，HE）染色

1.3.5 免疫组织化学染色

1.3.6 电镜标本制作和切片制备及染色

1.4 统计学分析

1.5 实验结果

1.5.1 神经功能障碍评分

1.5.2 脑梗死体积测定

1.5.3 脑组织病理形态变化

1.5.4 免疫组织化学染色检测结果

1.5.5 脑组织超微结构变化

1.6 讨论

1.6.1 自噬与缺血再灌注损伤

1.6.2 凋亡与缺血再灌注损伤

1.6.3 自噬与缺血预处理

1.6.4 凋亡与缺血预处理

1.6.5 自噬与凋亡

1.7 结论

参考文献

第2章 综 述神经细胞的凋亡与自噬

2.1 简介

2.2 神经细胞的凋亡

2.2.1 细胞凋亡的概述

2.2.2 细胞凋亡的发生过程

2.2.3 细胞凋亡的发生通路

2.2.4 脑缺血后细胞凋亡发生的大体机制

2.2.5 脑缺血后细胞凋亡发生的分子机制

2.2.6 脑缺血后细胞凋亡发生的线粒体机制

2.3 神经细胞的自噬

2.3.1 细胞自噬的概述

2.3.2 细胞自噬的种类

2.3.3 细胞自噬的发生过程和自噬体形成的一般分子机制

2.3.4 细胞自噬的特性和功能

2.3.5 自噬对神经细胞的影响

2.3.6 脑缺血后细胞自噬发生的通路

2.3.7 细胞自噬与凋亡的关系

2.4展望

参考文献

致谢

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