长柱金花茶化学成分及总黄酮提取分离工艺的研究

摘要

目的：选用长柱金花茶（Camellia.nitidissima var.longistyla）叶为研究对象，对其氯仿部位及正丁醇部位的化学成分进行分离分析，建立最佳总黄酮提取制备工艺方法，用VC（抗坏血酸）作为对照，通过对·OH和DPPH自由基清除能力来考察其抗氧化性，为开发利用长柱金花茶及其质量控制提供科学依据。　　方法：取烘干恒重剪碎后的长柱金花茶叶，用95％乙醇为提取溶剂，采用回流法提取得到乙醇总提取浸膏，用系统溶剂分离法分离得到石油醚部位、氯仿部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位；采用大孔吸附树脂法、薄层色谱法、硅胶柱色谱法、凝胶柱色谱法、聚酰胺柱色谱法、MCI柱色谱法、制备型高效液相色谱法、重结晶法等现代分离技术和方法对其化学成分进行分离和纯化，得到14个单体化合物，利用IR、1H-NMR、13C-NMR、MS等波谱方法，结合理化性质对其进行结构鉴定。以芦丁作为标准品，研究了长柱金花茶叶总黄酮含量测定；利用L9(34)的正交试验方法，选用乙醇浓度，提取温度，料液比以及提取时间作为考察因素，优选长柱金花茶中总黄酮提取工艺。用VC作为对照通过对·OH和DPPH自由基清除能力来考察其抗氧化性。　　结果：从长柱金花茶叶中分离得到14个单体化合物，用光谱、核磁共振、质谱等方法，鉴定了其中12个单体化合物，分别为：棕榈酸(palmitic acid,CZ-1)、3β-Acetoxy-6?,13β-dihydroxyolean-7-one(CZ-2)、山萘酚-3-O-β-D-葡萄糖苷(keampferol-3-O-β-D-glucopy rainoside,CZ-3)、α-菠菜甾醇(α-spinasterol,CZ-4)、β-胡萝卜苷(β-daucosterol,CZ-5)、5,7,3',4'-四甲氧基黄酮(5,7,3',4'-tetramethoxyflavone，CZ-6)、7,3',4'-三甲氧基-5-羟基黄酮(Trimetboxy-7,3',4'-bydroxy-5-flavone,CZ-7)、5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮(5,7,3',4',5'-pentamethoxyflavone,CZ-8)、3-O-乙酰齐墩果酸(3-O-acetyloleanolic acid,CZ-9)、正三十四烷醇(n-tetratriacontanol，CZ-10)、β-香树脂醇(β-amyrin,CZ-11)、α-菠菜甾醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(α-spinasterol-3-O-β-D-glucopyranoside,CZ-12)。以芦丁作为对照，长柱金花茶中总黄酮含量为57.50mg/g。经考察，用95%乙醇，料液比为1:40,提取温度为40℃，提取次数为3次，每次提取时间为2h作为长柱金花茶叶中总黄酮最佳提取条件，确立了长柱金花茶中总黄酮的制备工艺，从长柱金花茶中提取得到的总黄酮对DPPH以及·OH自由基具有较强的抗氧化能力。　　结论：从长柱金花茶叶中分离鉴定得到12个化合物，其中7个化合物为首次从金花茶组植物中分离鉴定出来。分别为：棕榈酸(palmitic acid,CZ-1)、3β-Acetoxy-6?,13β-dihydroxyolean-7-one（CZ-2)、β-胡萝卜苷(β-daucosterol,CZ-5)、5,7,3',4'-四甲氧基黄酮(5,7,3',4'-tetramethoxyflavone，CZ-6)、7,3',4'-三甲氧基-5-羟基黄酮(Trimetboxy-7,3',4'-bydroxy-5-flavone,CZ-7)、5,7,3',4',5'-五甲氧基黄酮(5,7,3',4',5'-pentamethoxyflavone,CZ-8)、3-O-乙酰齐墩果酸(3-O-acetyl oleanolic acid,CZ-9)。以芦丁作为对照品测得长柱金花茶中总黄酮含量为57.50mg/g。长柱金花茶叶中总黄酮提取工艺简单易行。确立了长柱金花茶中总黄酮的制备工艺，经富集后得到长柱金花茶总黄酮浸膏中总黄酮的纯度为62.10%。研究证实长柱金花茶叶具有良好的抗氧化能力。

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