IgG糖基化修饰在SLE发病中的意义

摘要

系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)是一种以自身抗原暴露、多种自身抗体产生、补体系统的激活及免疫复合物沉积为主要环节的累及多系统的自身免疫性疾病。由于目前本病的致病原因不明确，近年来伴随着糖组学的不断发展，证实了免疫球蛋白糖基化修饰参与了自身免疫性疾病的发病及诱导免疫耐受。　　目的:　　探讨系统性红斑狼疮患者血清IgG-Fc段N糖链结构的改变与SLE发病的相关性。　　方法:　　(1)收集50例SLE患者及26例健康孕妇(代表一定程度的免疫耐受状态)的空腹静脉血，离心后取上清置于-80℃冰箱保存。10例混合人丙种球蛋白(正常人的血清)。收集所有SLE患者一般情况、临床特征资料及实验室检查结果，并且根据SLE疾病活动性指标(SLEDAI-2000)对50例SLE患者进行临床分期，评分≦4分为静止期，评分≧5分为活动期。(2)利用ProteinG对血清中总免疫球蛋白进行分离纯化，经过SDS-PAGE验证后得到IgG，将纯化得到的IgG用PNGase酶酶切，经过进一步的富集与纯化得到N-糖链，利用凝集素芯片能够特异性地亲和免疫球蛋白(IgG)表面糖链的特性，激光扫描检测凝集素信号测定SLE（静止期、活动期）,孕妇同IVIG的IgG表面糖链的结构。(3)对比SLE(活动期,静止期)与正常妊娠及IVIG的糖基化异常并且分析SLE活动期与静止期患者血清糖链结构的改变与狼疮疾病活动度及肾损伤实验指标的相关性。　　结果：　　1.SLE患者血清中IgG-Fc段G2型半乳糖(15.92％±2.12%)、核心盐藻糖(71.76%±1.83%），唾液酸含量(3.05%±0.63%)与IVIG(22.2%±1.3%)(80.43%±1.61%)(8.38%±0.93%)及正常妊娠者（32.81%±1.56%)(85.4%±1.82%)(9.06%±1.89%)的 IgG相比明显降低(P＜0.05)， G0型半乳糖(23.29%±2.54%)及高甘露糖(13.75%±2.27%)含量较IVIG(19.33%±3.35%)(11%±3.86%)及正常妊娠期妇女(14.65%±1.58%)(6.22%±0.77%)明显增高(P＜0.05)， G1型半乳糖在SLE(46.98%±2.94%),IVIG(48.48%±4.66%),正常妊娠期妇女(46.33%±2.26%)差异不具有统计学意义(P＞0.05)。　　2.在SLE活动期患者其血清IgG表面G2型半乳糖(15.42%±3.78%)、唾液酸(2.86%±0.62%)含量较SLE静止期(17.86%±0.94%)(3.37%±0.52%)患者明显降低(P＜0.05)，而 G0型半乳糖(24.57%±2.21%)及高甘露糖(15.28%±1.05%)含量较SLE静止期(21.01%±1.08%)(11.04%±0.79%)明显升高(P＜0.05),SLE活动期的核心盐藻糖(71.7%±1.20%)水平与静止期(71.6%±1.55%)无明显差异(P＞0.05)。SLE患者体内IgG表面G0型半乳糖含量与SLEDAI评分呈正相关(r=0.704 P＜0.000)，G2型半乳含量与SLEDAI评分呈负性相关(r=-0.792 P＜0.000)，高甘露糖含量与SLEDAI评分呈正相关(r=0.731 P＜0.000)，唾液酸与SLEDAI评分无明显相关性(r=0.004 P＞0.05)。　　3.SLE患者体内IgG G0型半乳糖(r=0.504 P＜0.000)、高甘露糖(r=0.571 P＜0.000)与ds-DNA抗体呈正相关，G2型半乳糖与ds-DNA抗体呈负相关(r=-0.572 P＜0.000).SLE患者体内IgG G0型半乳糖(r=0.485 P＜0.000)、高甘露糖(r=0.754 P＜0.000)与24h尿白蛋白呈正相关，G2型半乳糖与24h尿白蛋白呈负相关(r=-0.513 P＜0.000)。SLE患者体内IgG G0型半乳糖(r=0.417 P＜0.05)、高甘露糖(r=0.460 P＜0.05)与β2-微球蛋白呈正相关，G2型半乳糖与β2-微球蛋白呈负相关(r=-0.422 P＜0.05)。　　结论:　　1.SLE患者与正常妊娠期妇女及IVIG相比体内IgG表面存在异常的糖基化修饰，提示IgG表面糖链结构的改变与SLE发病有关。　　2.与SLE稳定期的患者相比活动期的SLE患者IgG表面糖基化存在明显差异，提示IgG表面异常的糖基化修饰与SLE疾病活动性有关。SLE患者血清IgG表面糖链的含量与SLEDAI、C3、C4、CPR有相关性,提示IgG表面糖链与SLE疾病的活动有相关性。　　3.SLE活动期患者其ds-DNA抗体、24h尿蛋白、β2-微球蛋白水平明显高于静止期患者，且其IgG表面糖链与ds-DNA抗体、24h尿蛋白、β2-微球蛋白有相关性，提示IgG表面的糖链结构的改变与肾脏功能的损害有相关性。

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