MiR-124-3p参与老年大鼠体外循环术后认知功能障碍的机制研究

摘要

目的：研究体外循环术后术后认知功能损伤的分子机制，探讨microRNAs在大鼠体外循环术后认知功能障碍发生发展过程中的作用机制，为POCD的诊断和治疗提供理论依据。　　方法：选择健康雄性SD老年大鼠72只，18～20月龄，通过掷硬币法随机分为Sham组和CPB组，每组36只，CPB组大鼠麻醉后进行体外循环手术，Sham组大鼠只麻醉不进行体外循环手术。术后第7天通过Morris水迷宫及旷场实验检测大鼠认知功能；采用PCR法测定前额皮质及海马中miR-124-3p、miR-214-5p、miR-132-3p、LPIN1的表达含量；通过生物信息学技术预测miR-124-3p下游靶基因，采用Western Blot法分别检测前额皮质及海马lipin-1、Aβ1-42蛋白表达量，采用酶联免疫法测定前额皮质及海马胆固醇含量；采用免疫组化法测定前额皮质及海马中lipin-1、Aβ1-42蛋白表达位点及含量；采用双荧光素酶法验证miR-124-3p靶向调控LPIN1。　　结果：1.Morris水迷宫实验：两组大鼠术前逃避潜伏期与穿越平台次数无统计学差异（P＞0.05）；与Sham组相比，CPB组大鼠术后逃避潜伏期延长（P＜0.05），术后CPB组大鼠原平台区域穿梭次数较少（P＜0.05）。2.旷场实验：两组大鼠术前直立次数、中心穿梭次数、总路程和理毛次数无统计学差异（P＞0.05）；与Sham组相比，CPB组大鼠术后直立次数及中心穿梭次数较少（P＜0.05），而总路程和理毛次数无统计学差异（P＞0.05）。3.PCR测定结果：与Sham组相比，CPB组大鼠前额皮质及海马miR-124-3p明显降低（P<0.05），miR-214-5p、miR-132-3p无统计学差异（P＞0.05）,CPB组大鼠前额皮质及海马LPIN1表达水平升高（P＜0.05）。4.WB测定结果：与Sham组相比，CPB组大鼠前额皮质及海马lipin-1、Aβ1-42表达水平升高（P＜0.05）。5.免疫组化测定结果：与Sham组相比，CPB组大鼠前额皮质及海马lipin-1、Aβ1-42蛋白积分光密度值增加（P＜0.05）。6.胆固醇测定结果：与Sham组相比，CPB组大鼠前额皮质及海马胆固醇明显增高（P＜0.05）。7.双荧光素酶报告实验测定结果：在293T细胞中，miR-124-3p对靶基因LPIN1有直接调控作用。　　结论：1.体外循环术后可造成老年大鼠短期认知功能损伤；2.MiR-124-3p在体外循环术后认知功能障碍大鼠前额皮质及海马中下调，LPIN1、胆固醇、Aβ1-42在体外循环术后认知功能障碍大鼠前额皮质及海马中上调；3.体外循环术后可造成老年大鼠短期认知功能损伤，其机制可能与MiR-124-3p调控LPIN1表达，介导脂质代谢异常及Aβ蛋白代谢异常有关。

目录

前言

材料与方法

1 实验动物

2 主要实验试剂

3 主要实验仪器

4 实验方法

4.1 实验分组及技术路线

4.2 麻醉

4.3 体外循环操作步骤

4.4 行为学测试

4.5 灌注固定和取材

4.6 免疫组化

4.7 WB法测定 lipin-1 、Aβ 1-42蛋白表达水平

4.8 PCR法测定 miR-214-5p、miR-124-3p、miR-132-3p和LPIN1表达水平

4.9 靶基因预测

4.10 双荧光素酶报告基因检测

4.12 统计方法

结果

1 模型建立

2 行为学结果

2.1 术前行为学结果

2.2 术后行为学结果

3 前额皮质与海马中的miR-214-5p、miR-124-3p、miR-132-3p和LPIN1表达水平

4 前额皮质与海马中的lipin-1、Aβ1-42蛋白表达水平

5 前额皮质与海马的免疫组化分析结果

6 前额皮质与海马的总胆固醇含量

7 靶基因预测

8 双荧光素酶报告基因检测结果

讨论

结论

参考文献

英汉缩略词对照表

致谢

综述:LncRNA和microRNA在术后认知功能障碍中的研究进展