半乳糖凝集素4在非小细胞肺癌中的表达及对肿瘤细胞生物学行为的影响

摘要

目的:通过观察半乳糖凝集素4（Galectin-4，Gal-4）在非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer,NSCLC)组织及细胞中的表达，探讨其在NSCLC组织中表达的意义及对NSCLC细胞增殖、迁徙及凋亡等生物学行为的影响。　　方法:1、选取100例经手术切除的NSCLC癌组织作为实验组，取相应的癌旁正常肺组织作为对照组;采用免疫组织化学染色法检测Gal-4在两组组织中的表达情况，分析Gal-4在NSCLC中的表达与患者性别、年龄、吸烟情况、组织学类型、肿瘤大小、淋巴结转移、远处转移等临床病理特征的关系。2、选取3株常见的NSCLC细胞株(肺腺癌:A549、肺鳞状上皮细胞癌:H520、大细胞肺癌:H460)作为实验组，正常支气管上皮细胞(BEAS-2B)作为对照组;用Real-time PCR和Western blot法检测Gal-4mRNA及蛋白在4株细胞中的表达;筛选出Gal-4在蛋白水平表达最高的细胞株，转染LGALS4-siRNA作为实验组，转染NC-siRNA作为空白对照组，转染FAM-siRNA观察转染效率，用Western blot检测转染细胞中Gal-4的表达情况;应用CCK8法、划痕实验、流式细胞实验检测下调Gal-4蛋白表达对A549细胞的增殖、迁徙及凋亡等生物学行为的影响。　　结果:1、Gal-4在NSCLC癌组织中的表达率(48.00％)明显高于癌旁正常肺组织(0.00％)（P＜0.05）。2、Gal-4在肺腺癌中的表达率(84.44％)明显高于肺鳞状上皮细胞癌(22.22％)及大细胞肺癌(0.00％)，Gal-4在有淋巴结转移的NSCLC中表达率(61.22％)明显高于无淋巴结转移的NSCLC(35.29％)(P＜0.05);3、Gal-4的表达与肺腺癌的淋巴结转移相关(P＜0.05)，与肺鳞状上皮细胞癌淋巴结转移无关(P＞0.05)，与两者的性别、年龄、吸烟、肿瘤大小、远处转移等均无关(P＞0.05)。4、Real-time PCR检测到Gal-4mRNA在A549、H460、H520、BEAS-2B细胞中的表达量为:0.9992±0.2642、0.1179±0.3145、0.2515±0.0105、0.0053±0.0014,Westernblot检测到Gal-4蛋白在A549、H460、H520、BEAS-2B细胞中的表达量为:0.2401±0.0583、0.0005±0.0004、0.1134±0.0147、0.0002±0.0001;Gal-4基因及蛋白在4株细胞中的表达趋势一致;Gal-4在NSCLC细胞中表达较正常支气管上皮细胞明显升高，其中，在肺腺癌细胞中的表达最高，明显高于肺鳞状上皮细胞癌及大细胞肺癌细胞（P均＜0.05）。5、Gal-4在A549中表达最高，选取A549细胞转染FAM-siRNA，观察到转染效率约为100％，转染siRNA成功。6、Western blot检测得出Gal-4在转染3个LGALS4-siRNA靶序列及NC-siRNA序列的A549细胞中的表达为:LGALS4-homo-1021、LGALS4-homo-864、LGALS4-homo-346、NC-siRNA:0.2280±0.0895、0.1325±0.1271、0.0250±0.0198、0.2447±0.0734，3个不同的LGALS4-siRNA序列均下调Gal-4蛋白在A549细胞中的表达，以LGALS4-homo-346序列干扰Gal-4蛋白表达的效果最佳(P＜0.05)。7、选取LGALS4-homo-346序列下调Gal-4蛋白表达进行细胞功能实验，CCK8实验观察到A549细胞在转染NC-siRNA、LGALS4-siRNA后48h及72h时细胞的增殖能力分别为:48h:0.4993±0.0086、0.2707±0.0011,72h:0.5398±0.0165、0.3752±0.0005,转染组细胞的增殖能力均明显低于对照组(P＜0.05);划痕实验观察到A549细胞在转染NC-siRNA、LGALS4-siRNA后48h时细胞的迁徙能力，划痕愈合距离分别为:98.3333±3.2146、7.6667±0.5774，转染组细胞的迁徙能力明显低于对照组(P＜0.05);流式细胞实验观察到A549细胞转染NC-siRNA、LGALS4-siRNA后细胞的凋亡情况为:21.7108±34.6697、22.3683±35.4454，转染组细胞凋亡情况与对照组无明显差异(P＞0.05)。　　结论:1、Gal-4蛋白在NSCLC癌组织中的表达率及Gal-4基因与蛋白在NSCLC细胞中的表达水平均升高，均以肺腺癌升高最为明显。2、Gal-4蛋白在NSCLC组织与细胞中的表达趋势相同，Gal-4基因及蛋白在NSCLC细胞中的表达趋势一致。3、Gal-4对预测肺腺癌淋巴结转移有重要临床意义。4、Gal-4可促进肺腺癌细胞的增殖及迁徙，但对其凋亡无影响。

目录

摘要

前言

材料与方法

2 主要实验试剂与耗材

3 主要实验仪器

4 实验方法

5 统计学方法

结果

2．Gal-4表达与NSCLC临床病理特征的关系

3．Gal-4 mRNA在NSCLC细胞及正常支气管上皮细胞中的表达

4．Gal-4蛋白在NSCLC细胞及正常支气管上皮细胞中的表达

4、A549细胞转染FAM-siRNA的转染效率

5、siRNA下调A549宝细胞Gal-4的表达

3、下调Gal-4蛋白表达对A549细胞增殖的影响

4、下调Gal-4蛋白表达对A549细胞迁徙的影响

5、Gal-4表达下调对A549宝细胞凋亡的影响

讨论

结论

参考文献

英汉缩略词对照表

致谢

半乳糖凝集素4在肿瘤中的研究进展 综述

声明