开通玄府法对实验性大鼠脑出血后脑水肿及血脑屏障影响的研究

摘要

目的：基于玄府理论，研究开通玄府法对大鼠脑出血后神经功能缺损、脑组织含水量、超氧化物歧化酶活性(SOD)与丙二醛含量(MDA)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、血液流变学、血脑屏障通透性及血脑屏障超微结构的影响，揭示开通玄府法对脑出血后脑水肿、血脑屏障的作用机制，为“脑之玄府-血脑屏障”理论的构建提供依据。　　方法：1.分组，将180只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、加减祛风通窍方低、中、高剂量组，每组36只;2.给药剂量，低、中、高剂量组分别按照2.77g/kg·d-1、5.53g/kg·d-1、11.06g/kg·d-1给予加减祛风通窍方浓缩液灌胃;3.造模，用大鼠脑立体定位仪，将不抗凝大鼠尾动脉血50ul注入大鼠尾壳核制作脑出血(ICH)模型;4.取材及检测指标，于术后6h、3d、7d，经腹主动脉采血测血液流变学，断头取脑用干湿重法测脑组织含水量，脑组织SOD活力与MDA含量;经尾静脉注射伊文思蓝后灌注固定，取脑组织检测血脑屏障通透性，电子显微镜观察血脑屏障超微结构的改变;经心脏灌注固定，取脑组织制作石蜡切片，HE染色观察，免疫组化法测定MMP-9的表达。　　结果：1.神经功能缺损评分，与假手术组比较，模型组神经功能缺损评分在各个时点均升高(P＜0.05）。与模型组比较，低剂量组神经功能缺损评分在各个时间点均有降低趋势(P＞0.05）;中、高剂量组在在各个时间点神经功能缺损评分均降低，以高剂量组降低明显(P＜0.05）。2.脑组织含水量(BWC)，与假手术组比较，模型组在3d时BWC升高达高峰(P＜0.05），7d时仍高于假手术组(P＜0.05）。与模型组比较，低剂量组BWC在3d、7d时有所降低，但差异无统计学意义（P＞0.05）;中剂量组BWC在3d时降低(P＜0.05）;高剂量组BWC则在3d、7d时均明显降低(P＜0.05）。与低、中剂量组比较，高剂量组BWC在3d、7d时降低明显（P＜0.05）。3.EB含量(1)出血侧，与假手术组比较，模型组在各个时点出血侧EB含量均升高(P＜0.05），3d时达高峰。与模型组比较，低剂量组出血侧EB含量在6h、3d时有所降低(P＜0.05），7d时略有降低(P＞0.05);中、高剂量组在各时点出血侧EB含量均降低(P＜0.05），以高剂量组降低最为明显(P＜0.05）。(2)未出血侧，与假手术组比较，模型组在各个时间点未出血侧EB含量均升高(P＜0.05），在3d时达高峰(P＜0.05）。与模型组比较，低、中剂量组未出血侧EB含量在6h时略有降低(P＞0.05），在3d时呈现升高(P＜0.05），在7d时降低(P＜0.05）;高剂量组则在6h时升高，持续到3d(P＜0.05)，7d时降低（P＜0.05）。4.脑组织SOD活力，与假手术组比较，模型组在各个时点脑组织SOD活力均降低(P＜0.05），在3d时降至最低(P＜0.05)。与模型组比较，低、中剂量组在各时点SOD活力均升高(P＜0.05);高剂量组SOD活力在6h、3d时升高，但是在7d时明显降低(P＜0.05）。5.脑组织MDA含量，与假手术组比较，模型组在各个时点MDA含量均升高(P＜0.05），3d时升至最高(P＜0.05）。与模型组比较，低、中剂量组在各个时点MDA含量均降低(P＜0.05），高剂量组在6h、3d时降低(P＜0.05），在7d时表现为升高趋势(P＞0.05）。6.血液流变学，与假手术组比较，模型组全血黏度（低、中、高切变率）、红细胞聚集指数均升高（P＜0.05）。与模型组比较，各给药组全血粘度、红细胞聚集指数均降低(P＜0.05），以高剂量组降低最为明显（P＜0.05）。7.MMP-9的表达，与假手术组比较，模型组6h时MMP-9表达无明显变化，在3d、7d时表达升高(P＜0.05），3d时达高峰。与模型组比较，各给药组MMP-9的表达在6h出现升高，3d、7d时降低(P＜0.05)，以高剂量组改变明显(P＜0.05）。8.血肿周围血脑屏障超微结构，模型组基底膜走形不规则，厚薄不匀，内皮细胞肿胀明显，线粒体肿胀、嵴断裂。与模型组比较，低、中、高剂量组基底膜走形、内皮细胞、线粒体等结构异常均有所改善，血管周围水肿减轻，以高剂量组改善最为明显。　　结论：1.加减祛风通窍方能减轻脑出血后大鼠神经功能缺损以及脑水肿，改善出血侧BBB结构的损伤;2.主要机制可能是改善微循环，增强SOD活力，减少MDA含量，减轻MMP-9的表达，从而减轻血脑屏障的破坏，降低出血侧血脑屏障通透性，而使脑水肿减轻;3.高剂量的加减祛风通窍方会导致脑组织SOD活力的降低以及MDA含量的升高，可能与组方中麻黄的毒性作用有关，因此，此方应避免大剂量使用或者长期使用;4.脑出血后出血侧、未出血侧血脑屏障通透性均会增高，开通玄府法对于脑出血后血脑屏障具有双向调节的作用，即降低出血侧血脑屏障的通透性，而使未出血侧血脑屏障通透性升高，但此时的开放作用能否促进药物进入脑组织以增强疗效，仍需进一步研究。

目录

摘要

前言

材料与方法

1 实验材料与仪器

2 主要试剂与耗材

3 主要实验仪器

4 实验方法

5 统计学处理

结果

1 模型成功评价

2 神经功能缺损评分

3 脑组织含水量

4 HE染色

5 伊文思蓝含量

6 血脑屏障超微结构

7 血液流变学

8 血肿周围脑组织SOD活力、MDA含量

9 MMP-9的表达及积分光密度值IOD情况

讨论

1 脑出血模型的制备方法

2 实验大鼠神经功能缺损体征与脑水肿变化情况

3 加减祛风通窍方对脑出血后脑水肿的可能作用机制分析

4 基于“脑之玄府-血脑屏障”，探讨开通玄府法治疗脑出血后脑水肿的意义

5 加减祛风通窍方的组方原理

6 现代药理作用分析

7 本方中药治疗脑出血安全性问题

8 展望

结论

参考文献

英汉缩略词对照表

致谢

开通玄府法的研究与应用进展 综述

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