Kv7通道对子痫前期胎盘绒毛膜板动脉血管张力的影响及机制

摘要

目的:通过对比正常血压妊娠(NP)和子痫前期(PE)胎盘绒毛膜板动脉(CPAs)上Kv7通道表达及其对血管张力调节功能的差异，探讨Kv7通道对子痫前期胎盘绒毛膜动脉血管张力的影响及可能的机制。　　方法:　　1、离体血管环张力实验:①检测不同浓度Kv7通道阻滞剂XE991(10-7-10-4mol/L)对NP组(n=10)和PE组(n=10) CPAs血管环基础张力的影响，并分析比较NP组和PE组CPAs血管在10-6、10-5、5×10-5 mol/L不同浓度XE991作用下基础张力的变化;②检测不同浓度血管预收缩剂U46619（血栓素A2受体激动剂）（10-10-3×10-6 mol/L）在无XE991预处理或有XE991预处理时对NP组(n=10)和PE组(n=10) CPAs血管环张力的影响，并分析比较NP组和PE组XE991对预收缩剂U46619收缩作用影响的差异;③检测不同Kv7通道开放剂Retigabine、BMS-204352、ICA-27243、ML277（10-7-10-4mol/L）对NP组(n=10)和PE组(n=10) U46619(10-7mol/L)预收缩CPAs血管环张力的影响;　　2、实时荧光定量PCR(QPCR):15例确诊为子痫前期并在该院终止妊娠孕妇为PE组，15例我院终止妊娠的血压正常孕妇为NP组，分离提取胎盘绒毛膜板动脉血管平滑肌总RNA，合成cDNA并进行SYBR Green荧光定量PCR反应，得到相应的Ct值，计算出ΔCt值（=目的基因Ct值-β-actin内参基因的Ct值），然后以NP组第一个样本为参照因子计算ΔΔCt（=目的基因ΔCt值-NP1目的基因ΔCt值），2-ΔΔCt处理后可进行相对表达量分析;　　3、Western blotting实验:NP组和PE组标本各15例均来自定量PCR实验中研究对象，提取CPAs血管平滑肌总蛋白并测定蛋白浓度，SDS-PAGE电泳后转至PVDF膜，抗体孵育后凝胶成像系统成像后保存图像，用Quantity-One软件测量灰度值，以目的蛋白与内参β-Actin蛋白灰度值比值作为该目的蛋白的相对表达量。实验结果以均数±标准差(x±s)表示，采用SPSS11.0和GraphPad Prism5.0软件进行统计分析。　　结果:　　(1)离体血管环实验结果:①Kv7离子通道非特异阻断剂XE991(10-7-10-4 mol/L)能浓度依赖性的升高NP组(n=10) CPAs血管环的基础张力，与DMSO（二甲亚砜溶剂）对照组比较差异具有统计学意义;在5x10-5mol/L时张力变化百分比达最大，为44.67±9.52％，在10-4mol/L时出现明显舒张反应，张力下降达29.61±6.47％左右。Kv7离子通道非特异阻断剂XE991(10-6，10-5，5×10-5M/L)收缩PE组(n=10) CPAs血管环的作用较NP组明显减弱，差异具有统计学意义。②对NP组来说，未加XE991预处理时，预收缩剂U46619（10-10-3×10-6mol/L）能浓度依赖性的收缩CPAs血管环，与DMSO对照组比较差异具有统计学意义;加10-5mol/L XE991孵育后，U46619（10-10-3×10-6 mol/L）各浓度引起的张力变化百分比均较未用XE991孵育明显增加，差异具有统计学意义。对PE组来说，加10-5mol/LXE991孵育后，U46619在10-8、10-7、10-6mol/L浓度引起的CPAs血管环张力变化百分比较未加10-5mol/L XE991孵育相比差异不大，不具有统计学意义。③NP组:与DMSO对照组相比，Kv7通道开放剂Retigabine(n=10)、BMS-204352(n=10)（10-9～10-4mol/L）均能浓度依赖性的舒张U46619(10-7mol/L)预收缩的CPAs血管环,差异具有统计学意义;但ICA-27243(n=10)、ML277(n=10)对U46619(10-7mol/L)预收缩的血管环张力无影响,差异没有统计学意义。PE组:与NP组对比，Retigabine(n=10)、BMS-204352(n=10)(10-9～10-4mol/L)舒张U46619(10-7mol/L)预收缩的CPAs血管环的能力明显减弱，差异具有统计学意义;ICA-27243(n=10)(10-9～10-4mol/L)在10-5mol/L和10-4mol/L浓度能舒张CPAs血管环,差异具有统计学意义。ML277对U46619(10-7mol/L)预收缩的CPAs血管环的舒张作用不明显,差异不具有统计学意义。　　(2)NP组(n=15)和PE组(n=15)两组比较发现基因KCNQ1、KCNQ2、KCNQ3、KCNQ4、KCNQ5的mRNA相对表达量分别是:1.1148±0.0351、1.0172±0.0247、1.0337±0.0224、1.0223±0.0473、1.0280±0.0510和1.1017±0.0547、0.9993±0.0589、1.7448±0.0678、0.1123±0.0117、0.1133±0.0129;而且与NP组相比，KCNQ1和KCNQ2的mRNA的表达水平差异不具有统计学意义，基因KCNQ3、KCNQ4和KCNQ5的mRNA的表达水平差异具有统计学意义; PE组基因KCNQ3的mRNA表达水平明显上调，基因KCNQ4和KCNQ5的mRNA表达水平明显下调。　　(3)NP组(n=15)KCNQ3-5的蛋白相对表达量分别是:0.1845±0.032、0.6147±0.0426、0.5738±0.0192，PE组(n=15)KCNQ3-5的蛋白相对表达量分别是:0.5083±0.0377、0.2657±0.0461、0.2594±0.0587，三者之间两两比较差异明显，具有统计学意义;与NP组相比，PE组基因KCNQ3的蛋白表达水平明显上调，基因KCNQ4和KCNQ5的蛋白表达水平明显下调。　　结论:　　1.Kv7通道参与调节正常血压妊娠的胎盘绒毛膜板动脉血管张力;与正常血压妊娠相比，Kv7通道调节子痫前期的胎盘绒毛膜板动脉血管张力的能力明显减弱;　　2.与正常血压妊娠相比，子痫前期妊娠妇女CPAs血管平滑肌上KCNQ1、KCNQ2的mRNA表达差异不明显，KCNQ3亚型的mRNA及蛋白表达明显上调，KCNQ4、KCNQ5的mRNA及蛋白表达明显下调;　　3.Kv7离子通道调节子痫前期绒毛膜板动脉张力的能力明显减弱主要与KCNQ4和KCNQ5亚型表达下调有关;　　4.KCNQ3通道可能参与调节子痫前期妊娠妇女的CPAs血管的舒张，即KCNQ3通道的表达及功能的转变可以看作是KCNQ4/KCNQ5通道舒张子痫前期CPAs血管平滑肌作用减弱后的补偿机制。

目录

摘要

前言

材料与方法

1．研究对象

2．主要实验试剂

3．主要实验溶液的配制

4．主要实验仪器

5．实验方法

6．实验数据的处理

结果

2．血管环实验结果

4．荧光定量PCR实验结果

5．Western blotting实验结果

讨论

1、Kv7通道对胎盘绒毛膜板动脉(CPAs)血管张力的影响

2、Kv7通道在胎盘绒毛膜板动脉(CPAs)血管平滑肌上的表达

3、Kv7通道功能及表达的改变与子痫前期的病理生理机制关系

4、展望

结论

参考文献

英汉缩略词对照表

致谢

Kv7通道在血管平滑肌上的表达及功能

声明