UBM生物材料促进大鼠子宫内膜功能性修复的实验研究

摘要

目的：　　宫腔粘连指任何因素造成的子宫内膜基底层损伤，导致宫腔部分或全部堵塞，临床上可引起闭经、月经量减少、周期性腹痛、不孕、复发性流产、胎盘异常等一系列症状，对女性生育功能的影响十分严重。妊娠期刮宫是造成宫腔粘连的主要原因。宫腔粘连分离术是目前治疗宫腔粘连的主要方法，然而宫腔镜下宫腔粘连分离术后再粘连率高达62.5％，妊娠成功率仅22.5％～33.3％。目前临床上用于宫腔粘连分离术后预防再复发的方法多种多样，包括宫腔放置宫内节育器、球囊支架、透明质酸钠、羊膜、激素治疗等。然而重度宫腔粘连患者由于子宫内膜基底层受损严重，再生能力差，即使宫腔镜使宫腔解剖结构恢复且有多种治疗方式预防再粘连，但其术后由于子宫内膜再生修复障碍导致粘连的复发率仍较高。故寻求更有效的促进子宫内膜功能性再生的治疗方法在临床实践中已成为急需解决的困难。　　再生医学被认为是宫腔粘连患者的未来，干细胞治疗开启了再生医学修复子宫内膜损伤的新篇章，然而干细胞应用于临床有种种限制，阻碍了其发展。组织工程学为子宫内膜再生修复提供了一种新的选择，生物材料用于组织器官的再生修复在腹壁、口腔、皮肤、乳腺等领域已经取得良好的临床效果，但在子宫内膜的再生修复中尚处于起步阶段，仅有少量的动物试验报道。膀胱黏膜层基底膜(UBM)是一种衍生的ECM生物材料，保留有完整的基底膜，基底膜为隔离细胞与结缔组织、支撑上皮细胞、内皮细胞、肌细胞和雪旺氏细胞的特化ECM结构，基底膜的完整是机体实现自我功能性完全修复（子宫内膜/皮肤/肌肉/角膜）的基础，而且UBM与其他生物材料相比，免疫原性接近天然豁免、耐受感染、力学性能理想、有更高的生物活性和组织再生诱导能力。　　因此本研究将UBM生物材料植入子宫内膜受损的大鼠子宫中，评估UBM生物材料对损伤的子宫内膜的再生修复作用，为UBM应用于宫腔粘连的临床治疗提供一定的治疗依据。　　方法：　　1、切开子宫角，刀片损伤SD大鼠子宫内膜后，实验组将UBM生物材料植入大鼠宫腔后缝合子宫角，阳性对照组损伤内膜直接缝合子宫角，假手术组切开子宫角不损伤子宫内膜后缝合，阴性对照组不予任何处理。　　2、术后两周、四周收集各组子宫角标本，通过HE染色、Masson染色以及免疫组化观察比较子宫内膜组织学变化以及Ki67、微血管的改变;通过RT-PCR检测宫腔粘连相关因子在子宫中的表达;　　3、术后八周，通过RT-PCR检测，孕5天整合素αVβ3、LIF在子宫中的表达，评价子宫内膜容受性;于孕晚期观察大鼠子宫上胚胎数量及胚胎着床部位评价妊娠情况。　　结果：　　1、子宫大体外观:子宫内膜损伤术后两周、四周，UBM组的宫腔积液率明显低于损伤对照组。　　2、子宫内膜损伤术后四周子宫内膜厚度测量和腺体数量计数:UBM组的子宫内膜厚度和腺体数均明显高于损伤对照组，且与正常对照组、假手术组相近。　　3、Masson染色结果显示:损伤组大量胶原纤维沉积，瘢痕化严重，UBM材料修复组纤维化面积明显低于损伤对照组。　　4、免疫组化结果显示:UBM组的增殖细胞数目、微血管数量明显高于损伤对照组。　　5、RT-PCR结果显示:抗炎相关细胞因子(b-FGF)在UBM组的mRNA表达量高于损伤对照组;促炎性相关细胞因子(TNF-α)在UBM组的mRNA表达量低于损伤对照组;促纤维化相关的细胞因子TIMP、PDGFBB、TGF-B、COLIA1的mRNA表达量在UBM组中明显低于损伤对照组;而抗纤维化因子RUNX在UBM材料修复组的mRNA表达量明显高于损伤对照组。　　6、子宫内膜容受性:整合素αVβ3、LIF，在UBM组的mRNA表达量明显高于损伤对照组。　　7、妊娠结局显示:UBM组妊娠率接近正常对照组和假手术组，明显高于损伤组，胚胎着床数量UBM组高于损伤组，但少于正常对照组和假手术组。　　结论：　　1、UBM用于修复受损的子宫内膜能够减少子宫内膜组织的纤维化，促进新生血管的生成和细胞的增殖，减少促纤维化细胞因子增加抗纤维化细胞因子的分泌，能够在一定程度抑制纤维化，促进子宫内膜的再生修复。　　2、通过UBM修复宫腔粘连的子宫内膜能一定程度提高LIF和整合素αVβ3的表达，提高子宫内膜的容受性和生育能力。

目录

声明

摘要

中英文缩略词对照表

前言

一、材料与方法

(一)实验材料

(二)实验方法与步骤

二、结果

(二)大鼠子宫内膜损伤术后大体观察

(三)大鼠子宫内膜损伤术后组织学观察

(四)大鼠子宫内膜损伤后UBM生物材料植入对细胞因子的影响

(五)大鼠子宫内膜损伤后子宫内膜容受性和妊娠功能观察

三、讨论

结论

参考文献

综述 宫腔粘连的治疗策略及进展

硕士在读期间参与的科研工作及发表的文章情况

致谢