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摘要
第1章 绪论
1.1 植物的根系构型
1.2 植物的根系和非生物胁迫
1.3 植物激素生长素的信号通路
1.4 植物激素脱落酸的信号通路
1.5 脱落酸受体的功能冗余和功能多样性
1.6 MYB蛋白家族
1.7 生长素对根系构型的作用
1.8 脱落酸对根系构型的作用
1.9 其他植物激素对侧根的作用
1.10 植物激素生长素和脱落酸的拮抗作用和协同作用
第2章 实验材料与方法
2.1 主要实验仪器和试剂盒
2.2 植物材料与生长条件
2.3 植物材料的无菌培养
2.4 拟南芥侧根以及主根的测量统计
2.5 遗传杂交实验
2.6 分子克隆
2.6.1 聚合酶链式扩增反应(PCR)
2.6.2 核酸的琼脂糖凝胶电泳及回收
2.6.3 Gateway克隆
2.6.4 酶切反应
2.6.5 T4连接体系
2.6.6 大肠杆菌感受态细胞的制备以及化学转化
2.6.7 菌落PCR鉴定阳性克隆
2.6.8 质粒的小量抽提
2.6.9 酶切鉴定阳性克隆
2.7 测序样品的准备
2.8 电击转化农杆菌以及农杆菌浸花转化拟南芥
2.9 拟南芥阳性苗的筛选
2.10 植物基因组的抽提以及纯合体鉴定
2.11 植物RNA的抽提
2.12 RNA的琼脂糖凝胶电泳
2.13 RNA的反转录
2.14 荧光定量PCR
2.15 拟南芥原生质体的瞬时转化
2.15.1 质粒大量抽提
2.15.2 拟南芥原生质体的制备及转化
2.16 酵母双杂交
2.17 染色体免疫共沉淀
2.18 植物总蛋白的粗略抽提
2.19 蛋白免疫沉淀实验
2.20 Western Blot实验
2.21 原核蛋白的表达
2.22 凝胶阻滞实验
第3章 脱落酸受体PYL8通过结合MYB转录因子进而调控植物侧根发育
3.1 实验结果
3.1.1 PYL8促进侧根从脱落酸的生长抑制中恢复
3.1.2 脱落酸对侧根的抑制是通过PYLs,PP2Cs,SnRK2s来实现的
3.1.3 在pyl8及脱落酸不敏感突变体中脱落酸对主根生长和侧根发生的影响
3.1.4 外源添加生长素促进pyl8突变体中被脱落酸抑制的侧根生长
3.1.5 PYL8通过增强MYB77的作用来调控侧根发育
3.1.6 PYL8同时增强了MYB77的同源蛋白的转录活性
3.2 实验讨论
3.2.1 脱落酸信号通路抑制侧根在静止期的生长
3.2.2 盐胁迫和施加脱落酸对植物侧根发育的作用机制
3.2.3 PYL8蛋白通过和MYB转录因子作用促进侧根离开静止期
3.2.4 脱落酸和生长素的协同作用
3.2.5 后续实验
第4章 脱落酸受体PYL9通过结合MYB转录因子进而调控植物侧根发育
4.1 实验结果
4.1.1 脱落酸处理下pyl8-1pyl9双突变体的主根和侧根发生的抑制程度比pyl8-1低
4.1.2 脱落酸处理下pyl8-1pyl9双突变体的侧根静止期长于pyl8-1
4.1.3 外源添加生长素可以促进pyl8-1pyl9双突变体中被脱落酸抑制的侧根生长
4.1.4 诱导表达PYL9蛋白引起主根和侧根的异常生长
4.1.5 PYL9蛋白和MYB转录因子相互作用
4.1.6 脱落酸和生长素可以促进PYL9增强MYB转录因子的转录活性
4.2 实验讨论
4.2.1 简要总结
4.2.2 侧根生长对脱落酸的超敏感揭示了脱落酸的一个重要功能
4.2.3 脱落酸诱导的侧根生长静止需要脱落酸受体介导其恢复
4.2.4 生长素和脱落酸的相互作用
4.2.5 后续实验
参考文献
附录
致谢
在读期间发表的学术论文与取得的研究成果