低氧条件下肺泡上皮细胞通过CX3CL1促进肺动脉平滑肌细胞的增殖

摘要

目的：探讨肺泡上皮细胞能否对肺动脉平滑肌细胞增殖产生作用及其可能的作用途径，以此深入探讨低氧性肺动脉高压的可能形成机制，为临床治疗低氧性肺动脉高压提供新视角。　　方法：　　1.分离培养与鉴定细胞：采用酶消化法分离大鼠肺动脉平滑肌细胞；IgG包被法分离大鼠肺泡上皮细胞，采用免疫荧光染色法鉴定两种细胞。　　2.低氧对肺动脉平滑肌细胞增殖的影响：设置低氧组(5% O2)与常氧组(21% O2)培养肺动脉平滑肌细胞48h，采用MTT法检测肺动脉平滑肌细胞活力。　　3.低氧对肺泡上皮细胞的影响：设置低氧组与常氧组培养AECs48h，采用WB检测CX3CL1表达量、采用ELISA法检测培养上清液CX3CL1含量。　　4.肺泡上皮细胞对肺动脉平滑肌细胞增殖的影响：设置常氧对照组(常氧环境下单独培养肺动脉平滑肌细胞)、常氧实验组(常氧环境下利用Transwell小室共培养肺动脉平滑肌细胞与肺泡上皮细胞)、低氧对照组(低氧环境下单独培养肺动脉平滑肌细胞)、低氧实验组(低氧环境下利用Transwell小室共培养肺动脉平滑肌细胞与肺泡上皮细胞)，采用MTT法检测肺动脉平滑肌细胞活力。　　5.设计CX3CR1Si-RNA并转染肺动脉平滑肌细胞，设置低氧空白组(低氧环境下利用Transwell小室共培养肺动脉平滑肌细胞与肺泡上皮细胞)、低氧对照组(低氧环境下利用Transwell小室共培养转染ControlSi-RNA的肺动脉平滑肌细胞与肺泡上皮细胞)、低氧实验组(低氧环境下利用Transwell小室共培养转染CX3CR1Si-RNA的肺动脉平滑肌细胞与肺泡上皮细胞)，采用MTT法检测肺动脉平滑肌细胞活力。　　结果：　　1.肺动脉平滑肌细胞培养48h后，低氧组(5% O2)细胞增殖活性明显增加。　　2.与肺泡上皮细胞共培养后，肺动脉平滑肌细胞增殖活性增强。　　3.肺泡上皮细胞培养48h后，低氧组CX3CL1蛋白表达水平明显增加。　　4.经CX3CR1Si-RNA干预后，肺动脉平滑肌细胞CX3CR1mRNA表达量明显降低，肺动脉平滑肌细胞增殖活性明显下降。　　5.肺动脉平滑肌细胞转染CX3CR1Si-RNA后与肺泡上皮细胞共培养48h，肺动脉平滑肌细胞活力显著低于肺动脉平滑肌细胞转染ControlSi-RNA后与肺泡上皮细胞共培养组及肺动脉平滑肌细胞与肺泡上皮细胞共培养组(P＜0.05)。　　结论：　　1.低氧可以促进肺动脉平滑肌细胞的增殖。　　2.肺泡上皮细胞具有促进平滑肌细胞增殖的作用，且该作用在低氧环境下更加明显。　　3.低氧可以促进肺泡上皮细胞表达分泌趋化因子CX3CL1。　　4.肺动脉平滑肌细胞感染CX3CR1Si-RNA后，细胞内CX3CR1mRNA含量明显减少，细胞增殖活力明显降低。　　5.肺泡上皮细胞通过CX3CL1/CX3CR1发挥作用，促进肺动脉平滑肌细胞增殖。

目录

声明

第1章 绪论

1.1 研究背景

1.2 国内外研究现状

1.2.1 低氧性肺动脉高压的机制研究进展

1.2.2 肺泡上皮细胞与低氧性肺动脉高压的研究进展

1.2.3 趋化因子CX3CL1的研究进展

1.3.1 研究目的及意义

1.3.2 研究内容

1.3.3 特色与创新

1.3.4 课题研究的技术路线

第2章 材料与方法

2.1.1 实验动物

2.1.2 主要实验仪器

2.1.3 主要实验试剂

2.2 实验方法

2.2.1 大鼠肺动脉平滑肌细胞的分离培养与鉴定

2.2.2 大鼠肺泡上皮细胞的分离培养与鉴定

2.2.3 肺泡上皮细胞与肺动脉平滑肌细胞共培养

2.2.4 MTT法检测细胞增殖

2.2.5 ELISA法测上清液中CX3CL1表达量

2.2.6 CX3CR1 Si-RNA转染肺动脉平滑肌细胞

2.2.7 免疫印迹（Western-Blot）测CX3CL1表达量

2.2.8 RT-PCR技术检测CX3CR1 mRNA水平

2.3 统计学分析

第3章 结果

3.1 肺动脉平滑肌细胞体外培养与鉴定

3.2 肺泡上皮细胞体外培养与鉴定

3.3 低氧对肺动脉平滑肌细胞增殖能力的影响

3.4 肺泡上皮细胞对肺动脉平滑肌细胞增殖能力的影响

3.5 低氧对肺泡上皮细胞表达和分泌CX3CL1的影响

3.6 CX3CR1 Si-RNA对PASMCs表达CX3CR1 mRNA的影响

3.7 CX3CR1 Si-RNA对PASMCs增殖能力的影响

3.8 肺泡上皮细胞对PASMCs增殖能力的影响的分子机制

第4章 讨论

4.1 低氧促进肺动脉平滑肌细胞的增殖

4.2 肺泡上皮细胞能够促进肺动脉平滑肌细胞的低氧性增殖

4.3 低氧促进肺泡上皮细胞表达分泌CX3CL1

4.4 低氧状态下肺泡上皮细胞促进肺动脉平滑肌细胞增殖的可能机制

结 论

致 谢

参考文献

附 录

攻读硕士学位期间已发表的论文