针对B细胞淋巴瘤的激酶抑制剂的发现和药物学研究

摘要

BTK(Bruton's tyrosine kinase)是一个从属于TEC激酶家族的非受体酪氨酸激酶，主要在B细胞中表达，广泛分布于淋巴系统、造血系统和血液系统中，在BCR信号通路中起重要作用。有研究表明BTK的异常表达与B细胞淋巴瘤有密切关系。虽然近年来已经有一些BTK抑制剂在进行临床前或临床研究，但是大部分抑制剂并不仅仅抑制BTK，即靶向了如BMX、JAK3或EGFR等其它与BTK结构相似的激酶。而对这些激酶的抑制作用在临床上容易对病人造成如恶心、呕吐等不良反应。
　　通过基于结构的药物设计方法，我们发现了高活性(IC50:7nM)的不可逆的BTK抑制剂CHMFL-BTK-01（化合物9），并且在468种激酶（包括突变型）活性检测中，表现出极好的选择性。该抑制剂完全没有显示出靶向BMX、JAK3和EGFR这些与BTK结构相似的激酶的活性。在X射线晶体结构和半胱氨酸-丝氨酸突变的实验中也证实了CHMFL-BTK-01的结合模式是不可逆的。CHMFL-BTK-01不仅抑制了BTKY223的自磷酸化(EC50:＜30nM)，还将U2932和Pfeiffer细胞阻滞在G0/G1期，并且诱导细胞凋亡。
　　本论文主要从如下两个方面进行研究:
　　1.靶向BTK的高选择性的不可逆抑制剂CHMFL-BTK-01（化合物9）的发现
　　2.CHMFL-BTK-01（化合物9）的药理学及药代动力学研究
　　通过上述方面的研究，我们认为CHMFL-BTK-01是一个很好的用来研究BTK介导的信号通路以及作用的药物学工具小分子。

目录

声明

摘要

第一章 绪论

1．1 B细胞淋巴瘤

1．2 BTK和其介导的信号通路

1．3 BTK抑制剂的研究现状

1．4 研究方向与计划

第二章 靶向BTK的高选择性的不可逆抑制剂CHMFL—BTK-01即化合物9的发现

2．1 实验材料和方法

2．1．1 化合物检测和表征

2．1．2 合成路线及基本合成方法

2．1．3 用于IC50测定和动力学表征的ADP-Glo激酶测定法

2．2 实验结果和讨论

2．2．1 结构设计思路

2．2．2 构效关系研究

2．3 化合物表征

2．3．1 化合物9-51

2．3．2 中间化合物

第三章 BTK抑制剂的药理学和药代动力学实验和讨论

3．1 实验方法

3．1．1 细胞系及细胞培养方法

3．1．2 HEK293T-BTK稳转细胞系的构建和细胞中酶活实验

3．1．3 信号通路检测实验

3．1．4 细胞凋亡与细胞周期分析方法

3．1．5 体内药代动力学研究方法

3．1．6 蛋白的制备与结晶方法

3．1．7 晶体结构的确定与细化方法

3．2 CHMFL-BTK-M-01的选择性分析

3．3 CHMFL-BTK-M-01的结合模式的探索

3．4 CHMFL-BTK-M-01对B细胞相关癌细胞系的作用

3．5 体内药代动力学评价

3．6 结论和讨论

参考文献

附录

致谢

在读期间发表的学术论文与取得的其他研究成果