声明
摘要
缩略词表
第一章绪论
1．1．2链霉菌的生理学研究
1．2双组分信号转导系统
1．2．1双组分信号转导系统简介
1．2．2组氨酸激酶
1．2．3应答调控蛋白
1．2．4链霉菌中双组分信号转导系统的研究
1．3链霉菌的分泌系统
1．3．1Sec途径
1．3．2 Tat途径
1．3．3 Ⅶ型分泌系统(T7SS)
1．4蛋白分泌压力应答
1．4．1CpxRA TCS
1．4．2CssRS TCS
1．4．3MprAB TCS
1．5立题依据与研究内容
2．1．1菌株和质粒
2．1．2引物
2．1．3培养基及缓冲液
2．1．4抗生素保存和使用浓度
2．2实验方法
2．2．1链霉菌的菌种保藏及培养
2．2．3突变株Δ4155／56的构建、筛选和验证过程
2．2．4回补菌株C-Δ4155／56构建、筛选和验证过程
2．2．5天蓝色链霉菌的表型观察
2．2．6天蓝色链霉菌总RNA的提取操作
2．2．7Real-time PCR分析M145与Δ4155／56菌株中的表达差异基因
2．2．8SCO4156蛋白的异源表达和纯化
2．2．9目的蛋白的SDS-PAGE检测及浓度测定
2．2．10 SCO4156的体外结合验证—凝胶迁移试验
2．2．11 Flag标签回补菌株的构建及检测
第三章实验结果与分析
3．1．1序列保守性分析
3．1．2蛋白质相互作用分析
3．2基因缺失突变菌株Δ4155／56的构建
3．2．1突变质粒pD-SCO4155／56的构建
3．2．2双交换突变菌株Δ4155／56的筛选和验证
3．3回补菌株C-Δ4155／56的构建
3．3．2回补菌株C-Δ4155／56的筛选与验证
3．4M145、Δ4155／56、C-Δ4155／56的表型分析
3．5SCO4156蛋白的表达
3．6SCO4156的体外结合试验
3．6．1SCO4156与结构基因启动子的体外结合
3．6．2SCO4156与调控基因启动子的体外结合
3．7基因表达的定量分析(Real-time PCR)
3．7．1HtrA-like蛋白酶编码基因的定量分析
3．7．2预测潜在调控基因的定量分析
3．8SDS条件下基因表达的定量分析(Real-time PCR)
3．8．1HtrA-like蛋白酶编码基因的定量分析
3．8．2预测潜在调控基因的定量分析
3．9SCO4155／SCO4156影响次级代谢产物合成
3．9．1菌体生长曲线测定
3．9．2放线紫红素(ACT)的相对含量测定
3．9．3十一烷基灵菌红素(RED)的相对含量测定
3．9．4酪蛋白水解圈的初步测定
3．9．5act基因的定量分析
3．10基因缺失突变菌株Δ7075的构建、回补及表型分析
3．10．2回补菌株C-Δ7075的构建
3．10．3M145、Δ7075和C-Δ7075的表型分析
3．11Flag-tag回补菌株的构建和检测
3．11．1Flag-tag回补菌株的构建
3．11．2Flag-tag回补菌株的标签检测
4．1全文总结
4．2展望
附录
攻读硕士期间发表的论文
参考文献
致谢
山东大学;
