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摘要
符号说明
1．文献综述
1．1稻米品质性状概述
1．2淀粉的结构与组成
1．3Wx基因是调控稻米食味品质的主效基因
1．3．1Wx自然等位变异类型
1．3．2Wx基因的表达调控
1．4植物蛋白磷酸化修饰研究
1．5基因编辑技术的发展与应用
1．5．1基因编辑技术原理
1．5．2碱基编辑技术原理
1．5．3碱基编辑技术的发展与应用
1．5．4碱基编辑技术在植物中的应用
1．5．5利用CRISPR／Cas9技术编辑Wx基因的研究
1．6本研究的目的与意义
2．1实验材料与生长条件
2．2CRISPR／Cas9材料构建
2．2．1靶位点选择
2．2．2载体构建
2．2．3DNA胶回收
2．2．4大肠杆菌感受态细胞的转化
2．2．5质粒提取
2．2．6电击法转化农杆菌
2．2．7根瘤农杆菌介导的水稻转化
2．3水稻DNA的提取和材料检测
2．4引物
2．5稻米理化品质的检测
2．5．1米粉和淀粉的制备和处理
2．5．2表观直链淀粉含量的测定
2．5．3淀粉热力学特性测定
2．5．4淀粉黏滞性的测定
2．6淀粉精细结构分析
2．7稻米蒸煮食味值的测定
2．8定量RT-PCR分析
2．8．1水稻总RNA的提取
2．8．2第一链cDNA的合成
2．8．4荧光实时定量RT-PCR分析
2．9水稻种子GBSSI蛋白表达及酶活分析
2．9．1种子总蛋白的提取
2．9．2GBSSI蛋白提取
2．9．4GBSSI酶活测定
2．10统计分析
3．结果与分析
3．1．1转基因材料的获得
3．1．2转基因材料的理化品质
3．1．3转基因稻米的淀粉精细结构分析
3．1．4不同稻米食味品质分析
3．2利用碱基编辑系统创制Wx基因新等位变异
3．2．1Wx基因编码区靶位点的选择和载体构建
3．2．2Wx碱基编辑植株的检测及纯系筛选
3．2．3283位点碱基编辑植株的鉴定和效应分析
3．2．4298位点碱基编辑植株的筛选
3．2．5349位点碱基编辑植株的筛选
3．2．6569位点碱基编辑植株的筛选
4．1小结
4．2Wx的基因编辑
4．3GBSSI磷酸化位点的效应
4．4直链淀粉含量对稻米食味品质的影响
4．5研究展望
参考文献
致谢
扬州大学;
