猪丁型冠状病毒感染对ST细胞凋亡和自噬的影响

目录

声明

摘要

符号及缩略语

技术路线

1凋亡技术路线图

2自噬技术路线图

第一章文献综述

1猪丁型冠状病毒研究进展

1．1猪丁型冠状病毒流行情况

1．2猪丁型冠状病毒形态结构

1．3猪丁型冠状病毒基因组及蛋白

2细胞凋亡研究进展

2．1凋亡特征

2．2凋亡通路

2．3凋亡检测

3细胞自噬研究进展

3．1自噬特征

3．2自噬通路

第二章猪丁型冠状病毒感染对ST细胞凋亡的影响

1材料

1．1主要仪器设备

1．2抗体和试剂

1．3细胞和病毒

2方法

2．1病毒纯化

2．2噬斑试验

2．3间接免疫荧光试验(IFA)

2．4蛋白样品制备及免疫印迹

2．5Caspase8活性检测

2．6胞浆和线粒体组分分离

2．7线粒体膜电位检测

2．8病毒蛋白多抗制备

2．9数据分析

3结果

3．1病毒纯化

3．2噬斑测定病毒效价

3．3IFA检测病毒灭活效果

3．4猪丁型冠状病毒激活凋亡依赖于病毒复制

3．5猪丁型冠状病毒感染激活ST细胞内外源性凋亡通路

3．6猪丁型冠状病毒感染诱导CytC释放胞浆

3．7猪丁型冠状病毒感染未改变线粒体膜电位

4讨论

第三章猪丁型冠状病毒感染对ST细胞自噬的影响

1材料

1．1主要仪器设备

1．2抗体与试剂

1．3细胞和病毒

2方法

2．1病毒RNA抽提及反转录

2．2感受态细胞的制备(CaCl2法)

2．3构建pEGFP-LC3真核表达载体

2．4细胞转染

2．5免疫荧光和共聚焦显微镜观察

2．6免疫印迹

3．1猪丁型冠状病毒感染诱导ST细胞形成自噬体

3．2猪丁型冠状病毒感染诱导ST细胞形成自噬溶酶体

3．3猪丁型冠状病毒感染ST细胞诱导完全自噬反应

3．4CQ对猪丁型冠状病毒诱导的自噬有明显抑制作用

3．5Rapamycin对ST细胞自噬诱导效果不显著

3．6自噬对猪丁型冠状病毒的复制影响显著

4讨论

结论

附录

致谢

参考文献

攻读硕士学位期间论文发表情况