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摘要
符号与缩略语说明
绪论
第一章文献综述
1芽孢杆菌简介
2枯草杆菌表达系统特点
3枯草杆菌表达系统宿主菌株的改造与开发
3．1枯草杆菌蛋白酶缺失宿主的研究
3．2野生型枯草杆菌表达宿主的发掘
3．3转录调节因子的研究
3．4分泌途径的研究
3．5改善细胞生长和自溶
3．6基因组精简工程
4枯草杆菌表达系统的载体研究
5本研究的目的与意义
6本研究技术路线
第二章异源蛋白最适蛋白酶缺失菌株的构建
1材料与方法
1．1试剂与培养基
1．2供试菌株与引物
1．3菌株B．subtilis 168总DHA的提取
1．4枯草杆菌感受态的制备与转化
1．5枯草杆菌中八个胞外蛋白酶基因的无痕敲除
1．6构建表达单一蛋白酶的枯草杆菌突变体
1．7外源蛋白在枯草杆菌突变体中的分泌表达
1．8枯草杆菌八个蛋白酶位置整合载体的构建
2实验结果
2．1枯草杆菌蛋白酶缺失菌株的构建
2．2八株表达单一蛋白酶的枯草杆菌突变体的构建
2．3B．subtilis PD8与WB800在异源蛋白生产方面的比较
2．4甲基对硫磷水解酶(MPH)最适蛋白酶缺失宿主的构建
2．5百菌清水解脱氯酶(Chd)最适蛋白酶缺失宿主的构建
2．6α-淀粉酶(AmyM)最适蛋白酶缺失宿主的构建
2．7枯草杆菌整合载体的构建
3本章讨论
4本章小结
第三章野生型枯草杆菌表达宿主的筛选与改造
1材料与方法
1．1培养基与试剂
1．2供试菌株与引物
1．3可自发形成感受态的枯草杆菌菌株的筛选
1．4AmyM作为筛选优良表达宿主依据
1．5野生型枯草杆菌宿主改造
1．6异源蛋白在枯草杆菌中分泌表达
2实验结果
2．1AmyM作为报告蛋白进行野生菌株性能评估
2．2野生型枯草杆菌菌株的筛选与鉴定
2．3优良表达宿主的鉴定
2．4野生菌株的宿主改造
2．5MPH在PAA5菌株中的异源表达
3本章讨论
4本章小结
第四章MPH在枯草杆菌中稳定高效的表达
1材料与方法
1．1培养基与试剂
1．2供试菌株与引物
1．3DegUH12L点突变表达宿主的构建
1．5ΔdltABCD表达宿主的构建
1．6表达宿主MPH产量的测定
1．7更换Pac启动子控制MPH的生产
2实验结果
2．1枯草杆菌突变体的构建
2．2枯草杆菌突变体整合MPH表达盒
2．3枯草杆菌突变体MPH酶活测定
2．4P钟启动子控制MPH的生产
3本章讨论
4本章小结
全文总结
主要创新点
参考文献
附录
攻读硕士学位期间发表的论文
致谢
南京农业大学;
