基因编辑改造大肠杆菌MG1655合成L--苹果酸

目录

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摘要

第1章文献综述

1．1．2苹果酸的用途

1．2苹果酸的生产

1．3苹果酸的代谢途径和代谢控制策略

1．3．1苹果酸的代谢途径

1．3．2苹果酸的代谢控制策略

1．4基因编辑技术的发展和应用

1．4．1传统基因编辑技术概述

1．4．2CRISPR／Cas9编辑技术的发展和应用

1．5本课题的研究内容和意义

第2章材料与方法

2．1．1实验所用菌株、质粒和引物

2．1．2常用仪器和药品

2．1．3培养基和主要溶液配置

2．2实验方法

2．2．1DNA片段的回收

2．2．2大肠杆菌基因组的提取

2．2．3大肠杆菌质粒的提取

2．2．4大肠杆菌热激感受态的制备

2．2．5热激转化

2．2．6大肠杆菌电转感受态的制备

2．2．7电转化

2．2．8琼脂糖凝胶电泳

2．2．9摇瓶好氧发酵

2．2．10发酵产物的测定

2．2．11葡萄糖的测定

2．2．12全质粒PCR

2．2．13融合PCR(SOEing PCR)

2．2．14菌株菌体密度的测定

2．2．15大肠杆菌基因的敲除

第3章结果与讨论

3．1CRISPR／Cas9改造大肠杆菌结果

3．1．1敲除载体pTargetF-sgRNA的构建

3．1．2敲除基因上下游同源臂的制备

3．1．3基因敲除验证结果

3．2工程菌株发酵结果与分析

3．2．1基因poxB的敲除对菌株的影响

3．2．2基因pta-ackA的敲除对菌株的影响

3．2．3基因ldhA的敲除对菌株的影响

3．2．4基因pflB的敲除对菌株的影响

3．2．5苹果酸酶maeA／maeB的敲除对菌株的影响

3．2．6基因pfkA的敲除对菌株的影响

3．3小结

第4章结论与展望

4．2展望

致谢

参考文献

附录