声明
摘要
1引言
1．1．2ERM流行发生规律
1．1．3ERM临床症状、病理变化及诊断方法
1．1．4ERM的病原特性
1．2鲁氏耶尔森菌致病机制
1．2．1致病机制研究方法
1．2．2不良环境生存能力
1．2．3生物被膜系统
1．2．4铁元素的获取与利用
1．2．5细胞外毒素
1．2．6血清型与毒力关系
1．2．7毒力基因的表达调控
1．3鲁氏耶尔森菌溶血素基因
1．3．1溶血素命名及分类
1．3．2溶血素致病机制
1．3．3鲁氏菌溶血素基因研究进展
1．4同源重组技术
1．4．1RecA系统同源重组法
1．4．2Red系统同源重组法
1．4．3基于自杀载体的同源重组法
1．4．4基于温敏型质粒的同源重组法
1．5ERM免疫防控
1．6研究目的与意义
2材料与方法
2．1实验材料
2．1．1实验菌株、实验动物及细胞系
2．1．2重组表达载体及质粒
2．1．3主要仪器设备
2．1．4主要试剂
2．2实验方法
2．2．1鲁氏耶尔森菌的分离鉴定和致病性研究
2．2．2鲁氏耶尔森菌qPCR快速检测方法的建立
2．2．3虹鳟ERM病理模型
2．2．4鲁氏耶尔森菌感染虹鳟后脾脏转录组表达分析
2．2．5YR01株溶血素基因毒力片段筛选
2．2．6YR01株yhlB基因突变株YR01-ΔyhlB的构建
2．2．7YR01-ΔyhlB株的生长及理化特性分析
2．2．8YR01-ΔyhlB株作为减毒疫苗的可行性分析
3实验结果
3．1YR01株鉴定结果
3．1．1YR01株的形态特征
3．1．2YR01株的理化特性
3．1．3YR01株的分子特征
3．1．4YR01株的致病性分析
3．1．5YR01株感染虹鳟的组织病理学
3．2qPCR检测方法的建立
3．2．1扩增引物的特异性检测
3．2．2标准曲线构建
3．2．3灵敏度检测
3．3虹鳟ERM病理模型的构建
3．3．1临床症状观察
3．3．2组织病理观察
3．3．3致病菌检测
3．3．4病理模型评价
3．4鲁氏耶尔森菌感染虹鳟后脾脏转录组水平分析
3．4．1RNA测序与数据处理
3．4．2与参考基因组的匹配情况
3．4．3差异表达基因的识别与分析
3．4．4免疫相关DEGs的识别与分析
3．4．5qRT-PCR验证
3．5鲁氏耶尔森菌溶血素基因各片段毒力分析
3．5．1YR01株溶血素基因(yhlBA)分段克隆结果
3．5．2YR01株yhlBA基因片段表达载体的构建
3．5．3YR01株yhlBA基因片段原核表达产物纯化分析
3．5．4YR01株yhlBA基因片段原核表达产物的细胞毒性比较分析
3．6YR01突变株(YR01-ΔyhlB)的构建
3．6．1同源臂Kan抗性基因的扩增
3．6．2打靶载体p-yhlB的构建
3．7YR01-ΔyhlB株的生长及理化特性分析
3．7．2糖醇发酵能力检测
3．7．3生长特性检测
3．7．4药敏特性检测
3．8YR01-ΔyhlB株作为减毒疫苗的可行性分析
3．8．1细胞毒性检测
3．8．2靶动物毒性评估
3．8．3YR01-ΔyhlB株的免疫保护效果评价
4讨论
4．1ERM流行病学特征
4．1．1ERM的发生及在我国的流行情况
4．1．2鲁氏耶尔森菌的病原病理学特性比较
4．2鲁氏耶尔森菌检测技术的探索突破
4．3病理模型构建及其在研究中的应用
4．4鲁氏耶尔森菌引起的虹鳟转录水平表达差异
4．4．1细胞因子
4．4．2细胞凋亡
4．4．3模式识别受体
4．4．4信号通路
4．5鲁氏耶尔森菌溶血素基因致病性分析
4．6鲁氏耶尔森菌YR01-ΔyhlB突变株特性分析
4．7鲁氏耶尔森菌YR01-ΔyhlB突变株免疫原性分析
5结论
致谢
参考文献
攻读博士学位期间发表的学术论文
东北农业大学;
