地钱中合成芥子油苷的初步研究

目录

声明

本论文主要缩略词

摘要

1．前言

1．1芥子油苷简介

1．1．2芥子油苷在植物中的作用

1．1．3芥子油苷的生物合成途径

1．1．4芥子油苷的经济价值

1．2芥子油苷代谢工程研究进展

1．2．1十字花科植物中芥子油苷代谢工程

1．2．2非十字花科植物中芥子油苷代谢工程

1．2．3微生物宿主中芥子油苷代谢工程

1．3地钱作为生物反应器研究进展

1．3．1生物反应器简介

1．3．2地钱简介

1．4研究内容与目的意义

1．5技术路线

2．材料与方法

2．1实验材料

2．1．2菌种与质粒

2．1．3生化试剂

2．1．4培养基

2．1．5引物

2．2实验方法

2．2．1目的基因的克隆

2．2．2构建入门载体

2．2．3构建单基因表达载体

2．2．5构建SOT16-SUR1-CYP83B1多基因表达载体

2．2．6农杆菌介导的烟草瞬时转化

2．2．7农杆菌介导的地钱遗传转化

2．2．8蛋白质检测

2．2．9吲哚族芥子油苷的提取与含量分析

3．结果与分析

3．1吲哚族芥子油苷代谢途径基因克隆

3．2构建入门载体及表达载体

3．2．1构建入门载体

3．2．2构建单基因表达载体

3．3构建多基因表达载体

3．3．1CYP97B2-GGP1-UGT74B1-GSTF9基因Golden gate连接

3．3．2SOT16-SUR1-CYP83B1基因Gibson组装

3．4吲哚族芥子油苷代谢途径的瞬时表达

3．4．1农杆菌转化

3．4．2烟草中芥子油苷检测

3．5地钱遗传转化

3．6转基因地钱的分子检测及蛋白质检测

3．6．1DNA水平检测

3．6．2RNA水平检测

3．6．3蛋白质水平检测

3．7吲哚族芥子油苷含量检测

4．讨论

4．1构建多基因表达载体方法的选择

4．2地钱遗传转化体系外植体的选择

4．3地钱合成芥子油苷的可行性

5．结论

致谢

参考文献

攻读硕士学位期间发表的学术论文