麦根腐平脐蠕孢中受CsTup1调控的四个基因功能的初步探究

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摘要

1．文献综述

1．1小麦根腐病的发生与病原菌的研究概述

1．1．2麦根腐平脐蠕孢的形态特征及病害循环

1．1．3小麦根腐病的防治方法

1．2麦根腐平脐蠕孢分子机制研究进展

1．3转录抑制因子Tup1的研究进展

1．4转录组测序技术在分子生物学中的研究进展

2引言

3材料与方法

3．1试验材料

3．1．1供试菌株和载体

3．1．2实验中用到的仪器

3．1．3培养基

3．1．4试剂

3．2试验方法

3．2．1CTAB法提取基因组DNA

3．2．2切胶回收步骤

3．2．3基因序列的获得

3．2．4Split-PCR构建基因敲除盒

3．2．5PEG介导的原生质体转化方法

3．2．6四对引物检测敲除突变体

3．2．7四个基因敲除突变体的表型测定

3．2．8RNA的提取

3．2．9cDNA的获得

3．2．10敲除突变体目的基因的RT-PCR验证

3．2．11SYBR染料法荧光定量PCR

3．2．12敲除突变体的回补

4结果与分析

4．2四个基因在ΔCsTup1缺失突变体中差异表达情况

4．3蛋白序列的结构域预测和分析

4．3．2COCSADRAFT_90297蛋白分析

4．3．3COCSADRAFT_194504蛋白分析

4．3．4COCSADRAFT_116197蛋白分析

4．4基因敲除盒的获得

4．5敲除突变体的验证

4．5．1四对引物的PCR验证

4．5．2敲除突变体目的基因的RT-PCR验证

4．6C-Cs90297回补转化子的验证

4．6．1C-Cs90297回补载体的获得

4．6．2C-Cs90297回补转化子的PCR验证

4．6．3C-Cs90297回补转化子的RT-PCR验证

4．7突变体生物学表型测定结果

4．7．1ΔCs157558生物学表型测定

4．7．2ΔCs90297生物学表型测定

4．7．3ΔCs194504生物学表型测定

4．7．4ΔCs116197生物学表型测定

5结论与讨论

5．1结论

5．2讨论

参考文献