声明
致谢
摘要
第一章文献综述
1．1地黄简介
1．2药用植物中苯乙醇苷类化合物研究进展
1．2．1苯乙醇苷概述
1．2．2毛蕊花糖苷概述
1．2．4毛蕊花糖苷组织分布特点
1．2．5诱导子对苯乙醇苷及毛蕊花糖苷积累的影响
1．2．6毛蕊花糖苷生物合成途径
1．3WRKY转录因子
1．3．2WRKY转录因子的结构特点
1．3．4WRKY转录因子调控药用植物药效成分积累的研究进展
1．4药用植物基因编辑研究进展
1．4．2基因编辑的靶点设计
1．4．4基因编辑技术的应用进展
1．4．5基因编辑在药用植物中的研究现状
1．5本研究的目的和意义
第二章地黄WRKY基因的鉴定和表达特性分析
2．1材料和方法
2．1．1实验材料
2．1．2地黄WRKY基因的鉴定
2．1．3地黄WRKY结构与进化分析
2．1．5实时荧光定量分析
2．1．6地黄毛蕊花糖苷含量测定
2．2结果与分析
2．2．1地黄WRKY基因家族的鉴定
2．2．2WRKY蛋白的系统发育分析
2．2．3地黄WRKY蛋白基序及结构分析
2．2．4SA和MeJA处理下地黄WRKY基因的表达谱
2．2．5地黄12个组织中毛蕊花糖苷含量及WRKY基因的表达模式
2．2．6H2O2处理下地黄WRKY基因的表达谱
2．3讨论
第三章RgWRKY37基因的克隆和过量表达研究
3．1材料和方法
3．1．1实验材料
3．1．2RNA提取与反转录
3．1．3RgWRKY37基因的克隆
3．1．4蛋白序列分析
3．1．5亚细胞定位
3．1．6过量表达载体的构建
3．1．7农杆菌介导的地黄遗传转化
3．1．8地黄RgWRKY37过表达转基因毛状根毛蕊花糖苷含量的测定
3．1．9地黄RgWRKY37过表达转基因毛状根苯乙醇苷含量的测定
3．1．10转基因毛状根株系毛蕊花糖苷合成通路中相关酶基因表达量的检测
3．2结果与分析
3．2．4RgWRKY37蛋白的多序列联配
3．2．5RgWKKY37的系统进化分析
3．2．6RgWRKY37过量表达载体的构建
3．2．7亚细胞定位
3．2．8转基因毛状根的获得及阳性筛选
3．2．9毛状根株系的含量测定
3．2．10RgWRKY37过表达毛状根株系中关键酶基因的表达模式
3．3讨论
第四章地黄基因编辑体系的建立
4．1材料和方法
4．1．1实验材料
4．1．2地黄PDS基因的克隆及序列分析
4．1．4基因编辑载体的构建
4．1．5农杆菌介导的遗传转化
4．1．6基因编辑株系突变类型检测
4．1．7色素的提取与检测
4．2结果与讨论
4．2．1RgPDS1基因的克隆
4．2．2RgPDS1蛋白的序列分析
4．2．3RgPDS1基因在地黄不同组织中的表达模式
4．2．4CRISPR／Cas9系统的靶点设计和载体构建
4．2．5RgPDS1基因编辑株系的获得和阳性检测
4．2．6RgPDS1基因编辑株系突变表型的分析
4．2．7RgPDS1基因编辑株系突变位点分析
4．2．8地黄RgPDS1突变体叶绿素和类胡萝卜素含量的测定
4．2．9地黄rgpds1突变体中类胡萝卜素生物合成相关催化酶基因的表达量测定
4．3讨论
第五章地黄RgWRKY37基因的定向编辑
5．1材料和方法
5．1．1实验材料与生长条件
5．1．3地黄RgWRKY37基因编辑载体的构建
5．1．4农杆菌介导的地黄遗传转化
5．1．5基因编辑株系阳性植株检测
5．1．6基因编辑株系苯乙醇苷和毛蕊花糖苷含量测定
5．1．7基因编辑株系突变类型检测
5．2结果与讨论
5．2．3RgWRKY37基因遗传转化及编辑株系的获得
5．2．4RgWRKY37基因编辑株系的阳性检测
5．2．5RgWRKY37阳性基因编辑株系的含量测定
5．2．6RgWRKY37阳性基因编辑株系的突变类型分析
5．3讨论
本文创新点
参考文献
河南农业大学;
